[發明專利]一種改良的Neurobasal B27培養基、制備方法及應用

有效

• 申請號: 201610099536.2
• 申請日: 2016-02-21
• 公開（公告）號: CN105567635A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 滕曉春;滕衛平;單忠艷;張涵祎;奚月
• 申請（專利權）人: 中國醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N5/0735
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種改良的NeurobasalB27培養基，其特征在于，每升Neurobasal培 養液中含有以下組分：生物素0.09-0.11g、皮質酮18-22μg、L-肉毒堿1-3g、亞 油酸0.9-1.1g、乙醇胺0.9-1.1g、亞麻酸0.9-1.1g、D(+)-半乳糖13-17g、孕酮6-7μg、 腐胺二鹽酸鹽15-17g、視黃醇乙酸酯0.08-0.12g、去甲狀腺激素牛血清蛋白 2.2-2.8g、DL-α-生育酚0.8-1.5g、過氧化氫酶2-3g、DL-α-生育酚乙酸酯0.9-1.2g、 還原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸42-52μg、超氧化物歧化酶2-3g、轉鐵蛋白 4-6g、人胰島素3-5g、亞硒酸鈉0.12-0.16mg。

2.根據權利要求1所述的改良的NeurobasalB27培養基，其特征在于，每 升Neurobasal培養液中含有以下組分：生物素0.1g、皮質酮20μg、L-肉毒堿 2g、亞油酸1g、乙醇胺1g、亞麻酸1g、D(+)-半乳糖15g、孕酮6.3μg、腐胺二 鹽酸鹽16.1g、視黃醇乙酸酯0.1g、去甲狀腺激素牛血清蛋白2.5g、DL-α-生育 酚1g、過氧化氫酶2.5g、DL-α-生育酚乙酸酯1g、還原型谷胱甘肽1g、硫辛酸 47μg、超氧化物歧化酶2.5g、轉鐵蛋白5g、人胰島素4g、亞硒酸鈉0.146mg。

3.根據權利要求1所述的改良的NeurobasalB27培養基，其特征在于，每 升Neurobasal培養液中含有以下組分：生物素0.09g、皮質酮18μg、L-肉毒堿 1g、亞油酸1.1g、乙醇胺1.1g、亞麻酸1.1g、D(+)-半乳糖17g、孕酮6.1μg、 腐胺二鹽酸鹽15g、視黃醇乙酸酯0.12g、去甲狀腺激素牛血清蛋白2.8g、DL-α- 生育酚1.5g、過氧化氫酶3g、DL-α-生育酚乙酸酯1.2g、還原型谷胱甘肽1.3g、 硫辛酸51μg、超氧化物歧化酶2.8g、轉鐵蛋白5g、人胰島素4g、亞硒酸鈉0.15mg。

4.根據權利要求1所述的改良的NeurobasalB27培養基，其特征在于，每 升Neurobasal培養液中含有以下組分：生物素0.11g、皮質酮22μg、L-肉毒堿 3g、亞油酸0.9g、乙醇胺0.9g、亞麻酸1g、D(+)-半乳糖14g、孕酮7μg、腐胺 二鹽酸鹽17g、視黃醇乙酸酯0.09g、去甲狀腺激素牛血清蛋白2.2g、DL-α-生 育酚0.9g、過氧化氫酶2.2g、DL-α-生育酚乙酸酯1g、還原型谷胱甘肽0.8g、 硫辛酸43μg、超氧化物歧化酶2.3g、轉鐵蛋白4.2g、人胰島素3.2g、亞硒酸鈉 0.12mg。

5.根據權利要求1所述的改良的NeurobasalB27培養基的制備方法，其特 征在于，每升改良的NeurobasalB27培養基按照以下步驟制備：

步驟1，稱取0.09-0.11g的生物素、18-22μg的皮質酮、1-3g的L-肉毒堿、 0.9-1.1g的亞油酸、0.9-1.1g的乙醇胺、0.9-1.1g的亞麻酸、13-17g的D(+)-半乳 糖、6-7μg的孕酮、15-17g的腐胺二鹽酸鹽、0.08-0.12g的視黃醇乙酸酯、2.2-2.8g 的去甲狀腺激素牛血清蛋白、0.8-1.5g的DL-α-生育酚、2-3g的過氧化氫酶、 0.9-1.2g的DL-α-生育酚乙酸酯、0.8-1.3g的還原型谷胱甘肽、42-52μg的硫辛 酸、2-3g的超氧化物歧化酶、4-6g的轉鐵蛋白、3-5g的人胰島素、0.12-0.16mg 的亞硒酸鈉；

步驟2，將步驟1中各組分混合后加入到1000mL的Neurobasal培養液中， 震蕩攪拌，充分溶化各組分，獲得溶液；

步驟3，將步驟2中獲得的溶液，以孔徑為0.22μm的濾菌膜過濾除菌，得 到改良的NeurobasalB27培養基。

6.如權利要求1中所述的改良的NeurobasalB27培養基，在胚胎干細胞 培養中的應用。