[發(fā)明專利]間日瘧原蟲烯醇化酶的制備及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610099144.6 | 申請日： | 2016-02-23 |
| 公開（公告）號： | CN105543203A | 公開（公告）日： | 2016-05-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張超;顧亞萍;唐建霞;曹俊;高琪 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇省血吸蟲病防治研究所 |
| 主分類號： | C12N9/88 | 分類號： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;A61P33/06 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 殷紅梅;涂三民 |
| 地址： | 214064 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 間日 瘧原蟲 醇化 制備 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種間日瘧原蟲烯醇化酶的制備，其特征是，包括以下步驟：
（1）擴(kuò)增間日瘧原蟲烯醇化酶（enolase）基因：提取間日瘧原蟲基因組，采用引物P2和 引物P3擴(kuò)增第一段enolase基因，然后再以第一段enolase基因?yàn)槟０妫砸颬1和引物P3 擴(kuò)增出enolase基因；
（2）構(gòu)建pET28α/enolase表達(dá)載體：
a、純化步驟（1）得到的enolase基因；
b、將pET28α質(zhì)粒酶切、提純得到線性化的pET28α質(zhì)粒載體；
c、將線性化的pET28α質(zhì)粒載體和enolase基因連接，得到pET28α/enolase表達(dá)載體；
（3）重組enolase蛋白表達(dá)和純化：將pET28α/enolase表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到BL-21（DH3） pLys感受態(tài)細(xì)菌上，培養(yǎng)后的細(xì)菌進(jìn)行誘導(dǎo)、純化。
2.如權(quán)利要求1所述的間日瘧原蟲烯醇化酶的制備，其特征是：所述引物P1為5’- cggccatatggcccacgtaattactcgtatttctgcccgtgaaattttgg-3’；所述引物P2為5’- gtatttctgcccgtgaaattttggactcccgaggaaacccaaccg-3’；所述引物P3為5’- agcagcggccgctcaacttaattggtgcctaaatttctc-3’。
3.如權(quán)利要求1所述的間日瘧原蟲烯醇化酶的制備，其特征是：所述步驟（1）擴(kuò)增過程 為：94℃、4min；94℃、30sec；50℃、30sec；72℃、1.5min，共30個(gè)循環(huán)；72℃、7min；4℃、12 min。
4.如權(quán)利要求1所述的間日瘧原蟲烯醇化酶的制備，其特征是：所述純化enolase基因 具體為：使用PCR產(chǎn)物純化試劑盒提純步驟（1）得到的enolase基因后，以限制性內(nèi)切酶Nde I和NotI進(jìn)行酶切提純，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，用AgaoseGelExtractionKit提純。
5.一種間日瘧原蟲烯醇化酶體內(nèi)抑制瘧原蟲生長并保護(hù)宿主的應(yīng)用。
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