[發明專利]一種測定運動小鼠胰腺組織樣品中胰蛋白酶的方法

有效

• 申請號: 201610099005.3
• 申請日: 2016-02-23
• 公開（公告）號: CN105648033B
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 陳建春
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 青島中天匯智知識產權代理有限公司 37241
• 代理人: 郝團代

本發明屬于電化學技術領域，以肽為識別單元和亞甲基藍為信號分子對胰蛋白酶含量進行檢測。利用利用戊二醛法，通過肽末端氨基與DNA氨基作用，將肽和DNA交聯，得肽/DNA；然后利用Au原子與肽末端巰基之間作用，將肽/DNA修飾在金電極表面；再加入H1和H2，發生雜交鏈式反應形成DNA雙鏈，然后加入亞甲基藍，亞甲基藍扦插在形成的DNA雙鏈中；當有目標物胰蛋白酶存在時，胰蛋白酶將肽切割導致扦插有亞甲基藍的DNA雙鏈從電極上脫落，電化學信號降低，根據電化學信號的強弱實現目標物胰蛋白酶的測定，建立了一種對運動小鼠胰腺組織樣品中胰蛋白酶高靈敏度特異性檢測的電化學方法，方法具有簡單，成本低，靈敏度高的特點。

技術領域

本發明屬于電化學技術領域，以肽為識別單元和亞甲基藍為信號分子對胰蛋白酶含量進行檢測。具體涉及一種測定運動小鼠胰腺組織樣品中胰蛋白酶的方法。

背景技術

胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中，它不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。胰蛋白酶是特異性最強的蛋白酶，在決定蛋白質的氨基酸排列中，它成為不可缺少的工具。

目前發展起來的測定胰蛋白酶的方法主要有紫外分光光度法(Zhang L,Du J.Asensitive and label-free trypsin colorimetric sensor with cytochrome c as asubstrate[J].Biosensors&Bioelectronics,2016,79:347-352.)、液態晶體法(Chuang CH,Lin Y C,Chen W L,et al.Detecting trypsin at liquid crystal/aqueousinterface by using surface-immobilized bovine serum albumin.[J].Biosensors&Bioelectronics,2015,78.)、熒光法(穆麗璇,師文生.胰蛋白酶熒光化學傳感器的制備方法:,CN104152141A[P].2014；賈蘭,陳松,劉祥,侯文娟,張耀東.一種用于胰蛋白酶檢測的熒光探針及其制備方法:,CN104946249A[P].2015)、電化學方法(Ru-Ping L,Xiao-Cui T,Ping Q,et al.Multiplexed Electrochemical Detection of Trypsin andChymotrypsin Based on Distinguishable Signal Nanoprobes[J].AnalyticalChemistry,2014,86(18):9256-9263；Qiang Yi,Qicai Liu,Feng Gao,Qingquan Chen,Guina Wang.Application of an Electrochemical Immunosensor with a MWCNT/PDAAModified Electrode for Detection of Serum Trypsin[J].Sensors,2014,14(6):10203-10212.)、石英晶體微天平法(Stoytcheva M,Zlatev R,Cosnier S,et al.Highsensitive trypsin activity evaluation applying a nanostructured QCM-sensor[J].Biosensors&Bioelectronics,2012,41(1):862–866；Bayramoglu G,Arica MY.Development of a sensitive method for selection of affinity ligand fortrypsin using quartz crystal microbalance sensor.[J].Bioprocess&BiosystemsEngineering,2012,35(3):423-431.)、目視比色法(Zaccheo B A,Crooks R M.Self-Powered Sensor for Naked-Eye Detection of Serum Trypsin[J].AnalyticalChemistry,2011,83(4):1185-8.)等。但是，這些方法各有其缺點。