[發明專利]一種激活Nrf2-ARE通路的雙髻鯊魚肉抗氧化肽的用途

有效

• 申請號: 201610098098.8
• 申請日: 2016-02-23
• 公開（公告）號: CN105622719B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 王斌;趙玉勤;孫坤來
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P1/16;A61P17/00;A61P9/10;A61P3/10;A61P3/04;A61P39/06;A23L33/18
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

本發明公開了一種激活Nrf2?ARE通路的雙髻鯊魚肉抗氧化肽的用途。本發明以雙髻鯊魚肉為原料，通過雙酶酶解得酶解液，酶解液采用超濾、大孔樹脂純化、凝膠柱層析和反相高效液相色譜分離純化得到抗氧化肽Ile?Ile?Gly?Leu?Val?Pro(IIGLVP)，ESI?MS測定分子量為610.77 Da；制備的高活性抗氧化肽對DPPH自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基具有良好的清除作用；同時亦可促進Nrf2蛋白質積累，激活Nrf2?ARE通路，可用作治療肝損傷、皮膚光老化、動脈硬化、中風、糖尿病和肥胖等與Nrf2?ARE通路密切相關疾病治療的藥物和功能產品。

技術領域

本發明屬于生物工程技術的應用用途，具體涉及一種激活Nrf2-ARE通路的雙髻鯊魚肉抗氧化肽的用途 。

背景技術

鯊魚全身是寶，有的種類肉質鮮美，是餐桌上常見的菜肴。魚皮具有良好的韌性，是皮革加工業的原料。現代醫學證明鯊魚軟骨也具有很大的藥用價值，1992年美國首先將鯊魚軟骨粉直接用于臨床治療腫瘤。

雙髻鯊（Sphyrna lewini）為軟骨魚綱，真鯊目，雙髻鯊科，在我國主要分布于黃海、東海和南海。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種具有激活Nrf2-ARE通路的雙髻鯊魚肉抗氧化肽在肝損傷、皮膚光老化、動脈硬化、中風、糖尿病和肥胖等疾病治療藥物方面的應用用途。

本發明為解決上述技術問題所采取的技術方案為：該抗氧化肽用于制備預防或治療肝損傷、皮膚光老化、動脈硬化、中風、糖尿病和肥胖及其它與Nrf2-ARE通路密切相關的疾病的食品或保健食品的用途。該抗氧化肽為六肽化合物，氨基酸序列為Ile-Ile-Gly-Leu-Val-Pro (IIGLVP)，ESI-MS測定分子量為610.77 Da。

該雙髻鯊魚肉抗氧化肽的制備方法為：

1）雙髻鯊魚肉的預處理：取雙髻鯊魚肉用高速組織搗碎機處理成勻漿，加熱至90~95 ℃后保溫5~10min，然后按照料液比1g:2~4mL加入異丙醇，于25～30℃、功率450～500 W超聲提取2～3 h，然后于4℃、9000~10000 rpm離心10~15min除去異丙醇，收集脫脂雙髻鯊魚肉固形物；

2）脫脂雙髻鯊魚肉固形物的酶解：取脫脂雙髻鯊魚肉固形物，按固液比1 g:10mL～15 mL加入甘氨酸—氫氧化鈉緩沖液（0.05mol/L，pH 9.5），用0.1 mol/L HCl或0.1 mol/L NaOH調節pH到9.0～10.0，得混合液；將混合物溫度調制55～65℃，按照脫脂雙髻鯊魚肉固形物質量的1.2 %～1.5 %加入堿性蛋白酶（酶活力≥1.95×10⁵ U/g），酶解時間2 h～2.5 h后，酶解液于90～95℃保溫10～15min，滅酶活；將酶解液溫度調至35~45℃，按照脫脂雙髻鯊魚肉固形物質量的1.0 %～1.2%加入胰蛋白酶（酶活力≥2.5×10⁴ U/g），酶解時間3h～4 h，酶解液于90～95℃保溫10～15min后降至室溫，于10000～12000 rpm離心10～15min，取上清液。

）雙髻鯊魚肉抗氧化肽的分離制備：將上述上清液依次經超濾、大孔樹脂純化、凝膠柱層析和RP-HPLC純化，得雙髻鯊魚肉抗氧化肽。

作為優選，所述步驟3）的超濾、大孔樹脂純化、凝膠柱層析和RP-HPLC純化的具體過程為：

超濾：將上述酶解上清液采用1 kDa超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于1 kDa部分，得超濾酶解液。

大孔樹脂精制：將超濾酶解液配成15～20 mg/mL的溶液，緩慢加入到超濾酶解液與D101大孔樹脂比為1:10～15的玻璃柱中，用3～5倍柱體積的雙蒸水洗脫除去雜質，再用3～4倍柱體積的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇洗脫物，噴霧干燥，即為大孔樹脂精制多肽。