[發(fā)明專利]重型血友病AFⅧ基因內(nèi)含子22重組基因型檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610096502.8
• 申請日: 2016-02-22
• 公開（公告）號: CN105671154A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱玉華;劉晶晶;李印淑
• 申請（專利權(quán)）人: 亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 張明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物與新醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種在臨床樣本中檢測重 型血友病AFⅧ基因內(nèi)含子22重組基因型的試劑盒。

背景技術(shù)

1、關(guān)于血友病A

血友病A(HemophiliaA,HA)是最常見的X連鎖隱性遺傳性出血性疾病，其 病因是由于凝血因子Ⅷ(coagulationfactorⅧ,FⅧ)基因缺陷而導(dǎo)致FⅧ含量不足 或功能缺陷，從而引起凝血功能障礙。HA的人群患病率無種族和地區(qū)差異，有 較高的基因自發(fā)突變率，約30％的患者無家族史。HA是X連鎖隱性遺傳，男 性發(fā)病，女性攜帶，在男性人群中的發(fā)病率約為1/5000，女性患者罕見。臨床 上根據(jù)患者FⅧ促凝活性(FⅧcoagulantactivityFⅧ:C)及癥狀嚴(yán)重程度將其分 為重型、中型、輕型，比例分別為50％、10％和40％。重型HA患者關(guān)節(jié)、肌 肉等部位常會自發(fā)性出血不止，而中型與輕型HA患者一般是在創(chuàng)傷或手術(shù)后 出血不止，反復(fù)多次關(guān)節(jié)出血可導(dǎo)致患者致殘，甚至危及生命。

目前本病尚無根治方法，只能以凝血因子Ⅷ相關(guān)制品替代治療，給家庭帶 來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理負(fù)擔(dān)。因此，開展HA的攜帶者檢測和產(chǎn)前診斷、 阻止血友病A患兒及攜帶者的出生是當(dāng)前防治該病最有效的措施，具有重要的 應(yīng)用價值和社會效益。

2、關(guān)于血友病AFⅧ基因內(nèi)含子22重組基因型

FVIII基因全長186kb，位于X染色體長臂遠(yuǎn)端(Xq28)，含有26個外顯子 和25個內(nèi)含子，編碼2351個氨基酸。X染色體包含3個內(nèi)含子22同源序列(intron 22repeathomologousregion，int22h)，int22h-1位于FⅧ基因內(nèi)含子22內(nèi)，大小 為9.5kb，在FⅧ基因端粒端0.4Mb和0.5Mb處有2個同源拷貝，包括int22h-2 和int22h-3，序列分析相似度達(dá)99.9％。int22h-2與int22h-3方向相反，形成中 心長為67.3kb、兩臂50.5kb的回文結(jié)構(gòu)，int22h序列位于兩臂內(nèi)部，開始于中 央環(huán)末端666bp處。int22h-2與int22h-3發(fā)生染色體內(nèi)重組，導(dǎo)致回文結(jié)構(gòu)內(nèi)部 片段倒位，int22h-2與int22h-3交換位置，方向相反。因為int22h-2與int22h-3 在回文結(jié)構(gòu)中空間距離比較近，二者之間的重組更容易發(fā)生。這種int22h-2與 int22h-3位置互換的重組并不致病，為Xq28區(qū)域的多態(tài)性，包括int22h-3與 int22h-1反向的h1-2-3和int22h-2與int22h-1反向的h1-3-2兩種。

Lakich和Naylor于1993年最早發(fā)現(xiàn)約半數(shù)的重型HA患者是由F8基因內(nèi) 含子22倒位(Intron22inversion，Inv22)引起的。后來被證實(shí)是FⅧ基因內(nèi)int22h-1 與同一染色體內(nèi)相反方向的int22h-3或int22h-2之間的重組產(chǎn)生內(nèi)含子22倒位 (Inv22)。Inv22導(dǎo)致FⅧ基因斷裂成兩部分，外顯子1-22轉(zhuǎn)移至基因上游，而外 顯子23-26仍位于原處，導(dǎo)致兩部分在轉(zhuǎn)錄翻譯的過程中不能剪接到一起，從而 引起重型HA。int22h-1與int22h-3發(fā)生的倒位稱為I型內(nèi)含子22倒位(Inv22-I)， 在內(nèi)含子22倒位中約占84％，int22h-1與int22h-2發(fā)生的倒位稱為II型內(nèi)含子 22倒位(Inv22-II)，約占16％。