[發明專利]一種用MspI檢測人胃癌易感基因IL-1RN多態性rs9005的方法

在審

• 申請號: 201610095044.6
• 申請日: 2016-02-22
• 公開（公告）號: CN105567847A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 王凱娟;宋春花;侯瑞生;薛云紅;高三友;楊文杰;陳曉霖;徐婭娟;范琦琪
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用MspI檢測人胃癌易感基因IL-1RN多態性 rs9005的方法。

背景技術

單核苷酸多態性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)，主要是指在基因組水平上由單 個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。占 所有已知多態性的90％以上。SNP在人類基因組中廣泛存在，平均每500～1000個堿基對 中就有1個，估計其總數可達300萬個甚至更多。CAPs(cleavedamplificationpolymorphism sequence-taggedsites)CAPs技術又稱為PCR-RFLP，限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應 (PCR-RFLP)技術。PCR-RFLP的基本原理是用PCR擴增目的DNA，擴增產物再用特異 性內切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝膠電泳上分辨。不同等位基因的限制性酶切 位點分布不同，產生不同長度的DNA片段條帶。此項技術大大提高了目的DNA的含量和 相對特異性，而且方法簡便，分型時間短。這種方法與RFLP相比，不同的是以擴增替代 了酶切，避免了RFLP繁瑣的DNA酶切、轉移、雜交等步驟。

全世界范圍內，胃癌仍然是發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。胃癌的發生是一個 多步驟，多因素，多階段，多種機制共同作用的結果，包括基因因素，生物因素以及多種 環境危險因素。盡管近年來胃癌的死亡率已有顯著的下降，但胃癌的五年生存率依舊很低。 炎癥反應與腫瘤關系的研究一直是相關學者關注的熱點，大量研究結果表明胃部幽門螺桿 菌感染與胃慢性炎癥關系密切。幽門螺桿菌感染與免疫系統的細胞因子尤其是白介素家族 顯著相關。越來越多的研究結果表明炎性細胞因子，如IL-1，IL-1R1以及TNF-α可以顯 著地影響胃癌的易感性。因此，研究胃癌基因遺傳多樣性很有必要。作為一類重要的細胞 因子，IL-1家族基因可參與廣泛的生理過程，其中一個重要的角色是調節急性以及慢性炎 癥性疾病。IL-1在啟動和增強對幽門螺桿菌感染的反應方面起著關鍵作用，同時也發揮著 非常強的抑制胃酸分泌作用，而長期的抑制胃酸分泌作用是導致胃粘膜萎縮等癌前病變的 主要原因。許多研究發現IL-1基因家族的基因多態性與胃癌易感性相關。近年來IL-1RN 在腫瘤領域的研究取得了較大進展，但其在胃癌領域的研究開展相對較少，因此將一定功 能相關的IL-1RN位點多態性與胃癌結合起來可以更好的探討其對胃癌形成過程的作用， 揭示其與胃癌發生的關聯性進而探討其中的具體分子機制。

序列特異性引物PCR也稱等位基因特異性PCR(AS-PCR)，它的原理是基于TaqDNA 多聚酶不能修復DNA引物在3′末端的單個堿基錯配。所以，當引物的3′端核苷酸與等位 基因變異部位序列互補，則模板被擴增。但是，當引物3′端核苷酸與模板錯配，則模板不 會被擴增或擴增效率極低。每個等位基因的檢測，需設計兩套引物，一套為等位基因特異 性引物，一套為普通引物。PCR產物凝膠電泳以后，DNA的存在與否通過紫外線透射來 檢測，DNA條帶的存在或缺失即可確定基因型。在同一反應中的另一對引物(通常擴增人 生長激素基因的一段)總會產生一個DNA片斷，與HPA基因型無關，作為PCR有效性的 控制。基因特異性PCR(AS-PCR)的缺點是擴增效率較低，擴增特異性差，因此PCR產 物的特異性與穩定性無法保障，同時，分型結果也較容易誤判，穩定性較差。