[發明專利]一種胎兒染色體文庫構建的試劑盒、方法及其應用

有效

• 申請號: 201610094500.5
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105624798B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 陳勇;張夢玲;謝文龍;王玲
• 申請（專利權）人: 北京愛普益醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C12Q1/6869
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種胎兒染色體文庫構建的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：用于DNA提取的 試劑和用于DNA文庫構建的試劑。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述用于DNA提取的試劑包括：游離DNA 提取試劑、游離DNA沉淀試劑、游離DNA漂洗試劑；

優選地，所述用于DNA文庫構建的試劑包括：DNA末端修復試劑、連接修復DNA的接頭試 劑、PCR擴增引物和純化文庫的試劑；

優選地，所述試劑盒還包括用于收集提取DNA的離心柱、用于洗脫DNA與文庫的超純水 和磁珠懸浮液。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述游離DNA提取試劑包括：0.02- 0.2MTris-HCl緩沖液、100-500μg/mL蛋白酶K、0.01-0.1MEDTA和0.05-0.3％Triton-100；

優選地，所述游離DNA沉淀試劑為有機溶劑，優選為甲醇、無水乙醇或異丙醇中的任意 一種或至少兩種的混合；

優選地，所述游離DNA漂洗試劑包括：0.02-0.2MTris-HCl緩沖液、2-10M異硫氰酸胍和 0.4-3MNaCl。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA末端修復試劑包括： 0.02-0.2MTris-HCl緩沖液、0.05-0.2U/μLTaqDNA聚合酶、10-100mMMgCl₂和50-200mM KCl；

優選地，所述連接修復DNA的接頭試劑包括：10-100mMTris-HCl緩沖液、0.01-0.5mM T4DNA連接酶和0.1-1μM連接接頭；

優選地，所述PCR擴增引物為常規的通用引物和index引物；

優選地，所述通用物的核苷酸序列包含如SEQIDNO.1所示的片段；

優選地，所述index引物的核苷酸序列包含如SEQIDNO.1-12所示的片段；

優選地，所述PCR擴增引物的濃度為0.02-0.5mM；

優選地，所述純化文庫的試劑為磁珠懸浮液。

5.一種使用如權利要求1-4中任一項所述的試劑盒用于構建胎兒染色體高通量測序文 庫的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)提取待測樣本的DNA；

2)將步驟(1)得到的DNA進行PCR構建高通量測序文庫。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述待測樣本為母體外周血、尿液、腦脊 液、血清、唾液或是宮頸灌洗液中的任意一種或至少兩種的混合；

優選地，所述待測樣本的母體的孕周為12-24周。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述提取待測樣本的DNA包括 如下步驟：

(1)取300-500μL待測樣品，加入300-600μL，優選400-550μL游離DNA提取試劑，45-65 ℃，優選50-60℃水浴保溫5-20min，優選8-15min；

(2)加入300-600μL，優選400-550μL游離DNA沉淀試劑，室溫孵育1-10min，優選3-8min 后轉移至離心柱中；

(3)離心棄廢液，加入300-600μL，優選400-550μL游離DNA漂洗試劑，離心棄廢液，重復 該步驟一次；

(4)取出離心柱，轉移至干凈的收集管中，打開離心柱管蓋，室溫晾干1-10min，優選3- 8min；

(5)加入10-100μL，優選20-50μL超純水至離心柱中，離心收集游離DNA；

優選地，步驟(3)和步驟(5)所述離心的轉速為8000-15000r/min，優選為1000-13000r/ min，進一步優選為12000r/min；

優選地，步驟(3)和步驟(5)所述離心的時間為20-120s，優選為30-100s，進一步優選為 60s。