[發明專利]一種檢測TERT基因啟動子突變的試劑盒、其檢測方法及應用

在審

• 申請號: 201610093775.7
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN105586422A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 鄧友平;王紅衛;張紹波
• 申請（專利權）人: 蘇州捷諾威生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯瀟瀟

1.一種檢測TERT基因啟動子突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含針對TERT基 因的熒光標記探針。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光標記探針包括供體探針和受體 探針；

優選地，所述供體探針的核苷酸序列包含如SEQIDNO.1所示的片段，所述受體探針的 核苷酸序列包含如SEQIDNO.2所示的片段。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括檢測TERT的特異 性引物；

優選地，所述特異性引物的核苷酸序列包含如SEQIDNO.3-4所示的片段。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR緩沖 液、dNTPs、OneTaqDNA聚合酶。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述dNTPs的濃度為0.05-1μM，優選為 0.1-0.8μM，進一步優選為0.2μM；

優選地，所述OneTaqDNA聚合酶的濃度為0.5-8U/mg，優選為1-5U/mg，進一步優選為 1.5U/mg。

6.一種利用如權利要求1-5中任一項所述的檢測TERT基因啟動子突變的試劑盒在非疾 病診斷中檢測TERT基因啟動子突變的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)從待測樣品中提取模板DNA5-20ng，利用SEQIDNO.3-4的特異性引物對模板DNA 進行實時PCR擴增；

(2)將步驟(1)擴增后的片段加入SEQIDNO.1-2的熒光探針進行加溫熔解；

(3)通過得到的PCR產物的熔解曲線來判斷TERT基因的突變情況。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的模板來自于尿液細胞沉淀 物和/或膀胱組織。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的擴增條件為：

(a)95℃預變性4min，1循環；

(b)94℃變性20s、62℃退火20s、68℃延伸40s，45個循環；

(c)37℃延伸30s，1循環；

優選地，步驟(2)所述的加溫熔解的條件為：95℃1min，62℃30s，45℃30s，40℃2min，再 以0.1℃/秒的速度升高至70℃。

9.根據權利要求6-8中任一項所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述判斷TERT基因的 突變情況為：

當預測熔點±2.5℃范圍內出現單一熔融曲線峰，則待測樣本為單一擴增子；

當預測熔點±2.5℃范圍內出現峰值，則待測樣本為包含一個突變的細胞群。

10.一種如權利要求1-5中任一項所述的檢測TERT基因啟動子突變的試劑盒，或如權利 要求6-9中任一項所述的方法用于檢測C228T位點突變的應用。