[發(fā)明專利]一種裸藻蛋白的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610093734.8
• 申請(qǐng)日: 2016-02-22
• 公開（公告）號(hào): CN105646644A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張延林;趙璐;鐘進(jìn)義
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京珍生康業(yè)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K1/30
• 分類號(hào): C07K1/30
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 劉帥帥;張瑞玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種裸藻蛋白的制備方法，屬于精細(xì)化工領(lǐng)域。

背景技術(shù)

裸藻是一種古老的單細(xì)胞生物，是同時(shí)具有植物和動(dòng)物兩種特征的微細(xì)胞藻類，可以在淡水、海水和混合水中生長(zhǎng)繁殖。裸藻無細(xì)胞壁，胞質(zhì)裸露，只包附一層內(nèi)膜起到包裹隔離和內(nèi)外物質(zhì)交換的作用。裸藻能夠依靠自身表面吸收水中的有機(jī)物質(zhì)，在光照的條件下，能夠進(jìn)行光合作用，在利用CO₂的同時(shí)釋放氧氣。

裸藻蛋白也可稱為裸藻活性蛋白，裸藻蛋白是一種光敏蛋白，擔(dān)負(fù)裸藻內(nèi)能量合成與電子傳遞、調(diào)節(jié)細(xì)胞活性和免疫功能等功效，尤其是該蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞具有特殊的親和力和殺滅作用，使其在腫瘤的臨床治療中有廣闊的研究和應(yīng)用前景。但迄今為止，國(guó)內(nèi)外商未見有關(guān)于分離提取裸藻蛋白技術(shù)方法的報(bào)道。常用食物蛋白提取過程中應(yīng)用的細(xì)胞膜裂解劑、蛋白水解酶及噴霧高燥等試劑與方法，不但操作過程繁瑣，而且有可能對(duì)裸藻蛋白的結(jié)構(gòu)和活性造成損害，因而不適宜用于裸藻蛋白的分離提取。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種裸藻蛋白的制備方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是，以新鮮裸藻為原料，經(jīng)過清洗、弱酸溶膜、沉淀蛋白和冷凍干燥干燥等步驟，最后制成裸藻蛋白，主要包括以下工藝步驟：

（1）清洗干燥：將新鮮裸藻先用自來水反復(fù)請(qǐng)洗，去掉雜物，再用蒸溜水沖洗至無色清澈后濾干，再進(jìn)行噴霧干燥；

（2）弱酸溶膜：將上述清洗裸藻加入5-6倍體積、PH值為6.6-6.8、溫度為36-39℃的醋酸溶液，浸泡并攪拌2-3小時(shí)，使包附裸藻胞質(zhì)的內(nèi)膜溶解，胞質(zhì)充分釋放到溶液中；

（3）沉淀蛋白：將上述溶解了裸藻的醋酸溶液，加入鹽酸調(diào)節(jié)PH值為4.8-5.2，使其處于裸藻蛋白等電點(diǎn)范圍，靜置5-6小時(shí)，使裸藻蛋白沉淀，離心后丟棄上清液，收集裸藻蛋白沉淀；

（4）冷凍干燥：將上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)，冷凍干燥10-12小時(shí)，獲得干燥裸藻蛋白；

（5）密封包裝：將上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中真空密封包裝；常溫條件下可長(zhǎng)期保存。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明依據(jù)裸藻無細(xì)胞壁，裸露的胞質(zhì)表面只包附一層內(nèi)膜，而且該內(nèi)膜在中性環(huán)境下非常穩(wěn)定，對(duì)電解質(zhì)的成分和濃度不敏感，但在酸性水體中部穩(wěn)定等特點(diǎn)，建立了采用弱酸溶膜、沉淀蛋白和冷凍干燥等技術(shù)分離提取裸藻蛋白的方法，蛋白測(cè)定用考馬斯亮藍(lán)法，樣品中蛋白含量87%-91%。本發(fā)明不僅能很好保持裸藻蛋白的原有生物活性，而且方法簡(jiǎn)便，易于推廣應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供的裸藻蛋白的制備方法，其包括下列內(nèi)容：

1、清洗干燥：取500g新鮮裸藻用自來水清洗，去掉海水及泥沙雜物，再用300ml蒸餾水沖洗3次，過濾去水，獲得清洗后的新鮮裸藻，再進(jìn)行噴霧干燥。

2、弱酸溶解：將上述收集的裸藻置于1000mlPH值為6.6的醋酸溶液中浸泡3小時(shí)，溶液溫度為38℃，每間隔1小時(shí)充分?jǐn)嚢枰淮巍?

3沉淀蛋白：將上述溶解了裸藻溶液，加入鹽酸調(diào)節(jié)PH值為4.8，靜置5小時(shí)，每分鐘1500轉(zhuǎn)離心后丟棄上清液，收集裸藻蛋白沉淀。

4冷凍干燥：將上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)，冷凍干燥10小時(shí)，獲得干燥裸藻蛋白。

5密封包裝：將上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中，在抽真空條件下密封包裝。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供的裸藻蛋白的制備方法，其包括下列內(nèi)容：

1、清洗干燥：取500g新鮮裸藻用自來水清洗，去掉海水及泥沙雜物，再用300ml蒸餾水沖洗3次，過濾去水，獲得清洗后的新鮮裸藻，再進(jìn)行噴霧干燥。

2、弱酸溶解：將上述收集的裸藻置于1000mlPH值為6.8的醋酸溶液中浸泡3小時(shí)，溶液溫度為39℃，每間隔1小時(shí)充分?jǐn)嚢枰淮巍?

3沉淀蛋白：將上述溶解了裸藻溶液，加入鹽酸調(diào)節(jié)PH值為5.2，靜置6小時(shí)，每分鐘1500轉(zhuǎn)離心后丟棄上清液，收集裸藻蛋白沉淀。

4冷凍干燥：將上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)，冷凍干燥12小時(shí)，獲得干燥裸藻蛋白。

5密封包裝：將上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中，在抽真空條件下密封包裝。

對(duì)上述實(shí)施例提供的方法制備的蛋白進(jìn)行檢測(cè)，用考馬斯亮藍(lán)法，樣品中蛋白含量達(dá)到87%-91%。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。