[發明專利]用于檢測單線態氧的染料和熒光探針及其制備方法

在審

• 申請號: 201610093502.2
• 申請日: 2016-02-19
• 公開（公告）號: CN107099165A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 黃德建;沙蘭根·克里希納庫馬爾;吳海霞;陳代;郭晶晶
• 申請（專利權）人: 蘇州工業園區新國大研究院;新加坡國立大學
• 主分類號: C09B3/24
• 分類號: C09B3/24;C09B3/72;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 黎艷,劉培培

1.一種化合物，其結構如下式I所示：

其中，R₁為氫、烷基、烷氧基或芳香基；R₂為羥基、胺基、烷氧基或巰基。

2.用于合成如權利要求1所述化合物的方法，包括以下步驟：

將9，10-二氧代-9，10-二氫化蒽-1，4-二羧基氯與路易斯酸、甲苯和硝基苯以1：10～50：1～15：1～60的摩爾比例混合，在-10至150℃的反應溫度下，反應5分鐘至7天，所得產物即為權利要求1所述的化合物。

3.一種用于檢測單線態氧的熒光探針，其由權利要求1所述的化合物與熒光基團化學連接形成。

4.根據權利要求3所述的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針如下式II所示：

其中FL為熒光基團，X為能夠連接所述熒光基團和權利要求1所述的化合物的任何基團。

5.根據權利要求4所述的熒光探針，其中所述X選自-O-，-NH-，-S-或-N(CH₂CH₂)₂N-。

6.根據權利要求5所述的熒光探針，其特征在于，所述R為甲基，X為N(CH₂CH₂)₂N，且所述FL為氟硼二吡咯的衍生物，所述熒光探針的結構如下式IIa所示：

7.用于制備如權利要求3所述的熒光探針的方法，包括以下步驟：令權利要求1所述的化合物的胺衍生物與胺活性熒光基團反應。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述權利要求1所述的化合物的胺衍生物為其哌嗪衍生物，所述胺活性熒光基團為氟硼二吡咯的衍生物，其結構為：

其中，所述哌嗪衍生物與含氯熒光活性基團按1：0.1～10的比例，在-5～50攝氏度下，反應30分鐘到24小時，得到熒光探針。

9.一種用于檢測單線態氧的熒光探針，其由二甲基同核二蒽酮和熒光基團化學連接形成。

10.根據權利要求9所述的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針的結構如下式III所示：

其中R為氫、烷基或芳香基。當R＝CH₃時為IIIa。

11.用于制備如權利要求10所述熒光探針的方法，包括以下步驟：在堿的存在下，令二甲基同核二蒽酮磺酰氯與胺功能化熒光基團反應。

12.用于令權利要求3-6和9-10中任一項所述的熒光探針得到熒光增強的方法，包括：在光敏劑的存在下和光線影響下，令所述熒光探針與氧分子接觸。

13.根據權利要求12所述的方法在檢測單線態氧中的用途。

14.使用權利要求3-6和9-10中任一項所述的熒光探針或權利要求13所述的熒光增強的熒光探針在生物系統中進行單線態氧檢測的方法，包括以下步驟：

使細胞與含有熒光探針的陽離子脂質體接觸；

培養細胞，以允許探針進入細胞內；

洗滌細胞；

用活化劑處理細胞，以觸發內源性單線態氧的產生；

在共聚焦顯微鏡下觀察細胞的熒光強度。

15.根據權利要求3-6和9-10中任一項所述的熒光探針或權利要求13所述的熒光增強的熒光探針在環境或生物系統中進行單線態氧檢測的用途。

16.根據權利要求1或2所述的化合物或二甲基同核二蒽酮用于制備單線態氧探針，或作為化學系統中檢測單線態氧的熒光淬滅劑和/或單線態氧反應中心的用途。

17.用于檢測單線態氧的試劑盒，包含根據權利要求3-6和9-10中任一項所述的熒光探針或根據權利要求13所述的熒光增強的熒光探針或其組合。