[發明專利]一種復宮散對血液中TNF-α、IL-1α的測定方法

有效

• 申請號: 201610091203.5
• 申請日: 2016-02-18
• 公開（公告）號: CN105582513B
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 張傳師;彭津津;雍康;母治平;楊慶穩;王敬;程文超;周亞;劉震坤;周乾蘭
• 申請（專利權）人: 重慶三峽職業學院
• 主分類號: A61K36/9068
• 分類號: A61K36/9068;A61K9/14;A61P15/00;A61K33/06
• 代理公司: 11491 北京國坤專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 姜彥<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明公開了一種復宮散對血液中TNF?α、IL?1α的測定方法，該測定方法包括：選取病原菌株、分組與造模、制備復宮散、臨床觀察、白細胞分類計數、子宮分泌物檢查、TNF?α和IL?1α含量測定；采用Excel和SPSS16.0統計軟件進行數據分析，用平均值±標準誤差表示、結果與分析。本發明復宮散能顯著降低子宮內膜炎模型家兔血液中TNF?α和IL?1α的含量(P＜0.01)，而且降低程度與藥物劑量呈正相關，相較常用的中藥抗炎劑桃紅四物湯，復宮散與之差異不顯著，表明復宮散能減輕各種炎癥因子對子宮及全身的影響，發揮抗炎作用，起到治療子宮內膜炎的作用。

技術領域

本發明屬于醫學藥劑技術領域，尤其涉及一種復宮散對血液中TNF-α、IL-1α的測定方法。

背景技術

子宮內膜炎是一種常見生殖疾病，是導致奶牛繁殖性能下降和產奶量降低的主要原因之一，主要病原是致病性大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。目前該病治療主要依賴抗生素，但隨著奶質量標準不斷提高，中藥相較溫和、低殘留等特點不斷凸顯，桃紅四物湯是用于治療子宮內膜炎的經典純中藥復方制劑，復宮散是中藥制劑，在經典方劑基礎上新加幾味藥制備，臨床應用效果較好，但尚無數據說明。本發明基于炎性反應和引起炎性損傷的重要指標TNF-α和IL-1α的測定，以期科學判定復宮散的抗炎作用，并為其應用于子宮內膜炎防治上提供科學依據。

發明內容

本發明的目的在于提供一種復宮散對血液中TNF-α、IL-1α的測定方法，旨在解決引起炎性損傷的重要指標TNF-α和IL-1α的測定，以期科學判定復宮散的抗炎作用，并為其應用于子宮內膜炎防治上提供科學依據的問題。

本發明是這樣實現的，一種復宮散對血液中TNF-α、IL-1α的測定方法，該復宮散對血液中TNF-α、IL-1α的測定方法包括以下步驟：

分組與造模：取家兔55只(體重3kg±0.5kg母兔，健康未懷孕)，5只空白對照，50只連續2d對其子宮灌注造模菌液，通過觀測臨床癥狀、體溫變化、子宮分泌物檢查、細菌分離鑒定確定造模成功率(50只家兔其中48只造模成功，成功率96％)；

藥物的制備：制備復宮散；

指標觀測：所述指標觀測包括臨床觀察、白細胞分類計數、子宮分泌物檢查、TNF-α和IL-1α含量測定；

數據處理:測定數據采用Excel和SPSS16.0統計軟件進行數據分析，用平均值±標準誤差表示；

結果與分析:臨床表現及造模鑒定分析、復宮散對子宮內膜炎模型家兔血清TNF-α的影響分析、復宮散對子宮內膜炎模型家兔血清IL-1α的影響分析。

進一步，所述分組與造模前需先進行選取病原菌株，所述病原菌株為致病性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌；所述病原菌株為致病性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌中致病性大腸桿菌為血清型O111。

進一步，所述分組與造模中灌注造模菌液，所述造模菌液為致病性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌24h培養物復檢計數后等比例混合，菌液濃度≥2.5×10⁹/mL。

進一步，所述指標觀測中所述的臨床觀察，觀察造模前后、給藥前后家兔精神、飲食、陰門腫脹、陰道充血及子宮分泌物變化；

所述白細胞分類計數，造模前后、空白對照組前后耳緣靜脈抗凝采血1mL，用全自動血液細胞分析儀測定血常規，重點比較白細胞分類的變化；

所述子宮分泌物檢查，采用姬姆薩染色鏡檢；同時取2mL子宮分泌物，加入等體積4％氫氧化鈉，混合煮沸，冷卻后觀察，檢測分泌物中尿藍母；

所述TNF-α和IL-1α含量測定，對末次灌胃24h后的家兔耳緣靜脈采血1mL并分離血清，同時取上述造模前后備用血清，按照兔TNF-α酶聯免疫檢測試劑盒、兔IL-1α酶聯免疫檢測試劑盒說明書測定血清TNF-α和IL-1α含量。