[發(fā)明專利]滿天星異葒草苷在制備治療化學(xué)性肝纖維化藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610088625.7
• 申請日: 2016-02-17
• 公開（公告）號: CN105726528A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃權(quán)芳;林興;呂淑娟;陳永欣;黃仁彬;張士軍;韋玲;梁春宏
• 申請（專利權(quán)）人: 黃權(quán)芳
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P1/16;C07D407/04
• 代理公司: 廣西南寧明智專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 45106
• 代理人: 黎明天

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥滿天星提取物的用途，具體地說是以滿天星異葒草苷為原料在制備治療四氯化碳引起的化學(xué)性肝纖維化藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝纖維化（liverfibrosis）是機(jī)體對慢性肝損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，病因很多，包括病毒性、自身免疫性、藥物或毒物、膽汁淤積以及代謝性疾病等，如不及時(shí)治療，將導(dǎo)致肝硬化、肝功能衰竭甚至肝細(xì)胞癌（HCC）。肝纖維化的特征是細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）和膠原蛋白（以I型和III型為主）的過度沉積。現(xiàn)已知，過量的ECM沉積，改變了肝臟的正常結(jié)構(gòu)，擾亂了器官的正常功能，導(dǎo)致肝臟的病理生理性損害。四氯化碳（CCl₄）是選擇性肝臟毒性藥物，過氧化損傷是其產(chǎn)生肝毒性的重要機(jī)理，其作用機(jī)制主要是，CCl₄進(jìn)入肝臟后，引起肝小葉內(nèi)中央靜脈周圍的細(xì)胞壞死，導(dǎo)致纖維增生，是國內(nèi)外常用的肝纖維化模型。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為肝纖維化是一種不可逆的疾病，然而，最近的研究表明，肝纖維化甚至是肝硬化也是具有可逆性的。因此，如何抑制肝纖維化，并找到一種安全有效的藥物來逆轉(zhuǎn)肝纖維化已經(jīng)成為該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

目前，臨床對肝纖維化的治療仍沒有明確的方案和有效治療藥物。近些年來，國內(nèi)外大量研究表明天然藥物和中藥在治療肝纖維化方面顯示出了可靠療效和較少不良反應(yīng)的特點(diǎn)。因此采用現(xiàn)代化技術(shù)從天然藥物和中藥中開發(fā)治療肝纖維化的新藥具有重要意義。

滿天星（GypsophilaelegansBieb），又名絲石竹、霞草等，是石竹科石頭花屬植物，是廣西壯民族地區(qū)抗肝臟疾病習(xí)用草藥，其主要活性成分之一滿天星異葒草苷（isoorientin-2″-O-α-L-arabinopyranosyl，IOA）對CCl₄誘導(dǎo)的肝損傷、炎癥、肝纖維化的作用尚無報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是從天然藥物和中藥中開發(fā)治療肝纖維化的新藥，挖掘草藥滿天星的新用途。

本發(fā)明是基于發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)研究而完成的。研究分兩大部分：

一、滿天星異葒草苷的制備

提取方法：干燥的滿天星10kg粉碎后，用80L的75%乙醇回流提取3次，合并3次乙醇提取液，回收乙醇，得到乙醇提取物315.7g。乙醇提取物加入630ml蒸餾水搖勻成懸浮液，接著分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，萃取方法簡述如下：首先，用630ml石油醚萃取，棄石油醚液；接著，用630ml乙酸乙酯萃取，棄乙酸乙酯液；最后，用630ml正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取物177.6g。

純化方法：正丁醇萃取物上D101型大孔樹脂，先用5倍量水洗脫后，再用10倍量90%的甲醇洗脫，回收甲醇，得粗提物。將粗提物溶于甲醇，與等量硅膠拌樣，上樣于硅膠柱，以甲醇-乙酸乙脂-水不同比例即3：3：2；4：3：2；5：3：2；6：3：2；7：3：2；8：3：2；9：3：2；10：3：2，進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜跟蹤，合并相似餾分。合并用比例為4：3：2；5：3：2；6：3：2；7：3：2的甲醇-乙酸乙脂-水洗脫的餾分，再經(jīng)3次硅膠柱層析后再次合并相似餾分，回收洗脫劑，得淡棕色結(jié)晶28.3mg。

二、滿天星異葒草苷治療CCl₄誘導(dǎo)肝纖維化藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

將SD雄性大鼠以CCl₄誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，觀察滿天星異葒草苷治療化學(xué)性肝纖維化的作用。結(jié)果表明滿天星異葒草苷能明顯降低血清谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）的水平；肝組織白細(xì)胞介素-1（IL-1），人腫瘤壞死因子-α（TNF-α），轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1），升高白細(xì)胞介素-10（IL-10）含量；降低肝組織及血清丙二醛（MDA）的水平，顯著提高肝組織超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性，提示滿天星異葒草苷具有抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的作用；此外，滿天星異葒草苷可明顯降低血清透明質(zhì)酸（HA），層粘連蛋白（LN）的含量，說明滿天星異葒草苷具有抑制膠原沉積的作用。

H&E染色、VG染色及Masson染色病理檢查結(jié)果顯示，正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰且完整，以中央靜脈為中心，向四周呈放射狀排列，肝細(xì)胞未見變性或壞死。模型組大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、氣球樣變，肝小葉被破壞，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量大小不一的脂防空泡，膠原纖維增多，或肝局灶性壞死以及淋巴細(xì)胞浸潤的現(xiàn)象。滿天星異葒草苷組大鼠可觀察到肝組織病理損傷比模型模型組明顯減輕。