[發明專利]一種銀耳膠原蛋白肽的提取方法

在審

• 申請號: 201610088324.4
• 申請日: 2016-02-17
• 公開（公告）號: CN105524964A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 陳蓉蓉;張帆;林大偉
• 申請（專利權）人: 常州市慶發工業氣體有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12N11/14;C12N11/10;C07K14/78;C07K1/34
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1.一種銀耳膠原蛋白肽的提取方法，其特征在于具體提取步驟為：

（1）稱取30～40g可溶性淀粉溶于300～400mL去離子水中，裝入帶有攪拌器和溫度計的1L三口燒瓶中，再加入1～2mL濃度為0.2mol/L氯化亞鐵溶液和2～3mL質量濃度為30%雙氧水，啟動攪拌器以300～400r/min轉速進行攪拌；

（2）在攪拌過程中滴加35～45mL濃度為1mol/L的燒堿溶液，控制滴加速度使其20～30min內滴加完畢，再將三口燒瓶移入油浴鍋，加熱升溫至100～110℃，保持油浴溫度不變，繼續攪拌反應3～4h后放入溫度為4～6℃冰水浴中，靜置沉淀10～12h后過濾得到濾渣，干燥后得到磁性淀粉微球；

（3）稱取5～10g木瓜蛋白酶和3～5g堿性蛋白酶加入400～500mLpH7.0的磷酸緩沖液中，放置在超聲振蕩儀中，以100～200W功率超聲振蕩25～35min后，加入20～30g上述制得的磁性淀粉微球，繼續振蕩8～10h，將反應液用臥式離心機以8000～9000r/min的轉速離心10～15min，分離去除上清液，得到固定化蛋白酶，備用；

（4）稱取400～500g干銀耳放入40～50℃的溫水中浸泡1～2h，待其充分溶脹后，用蒸餾水將其表面污物清洗干凈，用剪刀將洗凈后的銀耳剪成1cm×1cm的小塊，分別用1～2L濃度為0.2mol/L燒堿和1～2L無水乙醇浸泡1～2天，最后用去離子水沖洗5～7遍，得到預處理后的銀耳；

（5）將300～400g上述預處理后的銀耳裝入高壓反應釜中，按料液比為1:2向釜內加入去離子水，升高釜內溫度至100～200℃并提高壓力至0.2～0.3MPa，保溫保壓處理30～40min后出料；

（6）將上述物料移入酶解罐，加入物料總質量1～2%的備用的固定化蛋白酶，用保鮮膜密封罐口后放入恒溫箱中，升溫至40～50℃，保溫酶解6～8h后，在酶解罐周圍施加勻強磁場，分離回收磁性固定化蛋白酶，再將酶解液用孔徑為0.4～0.5μm的納濾膜進行過濾，得到大分子膠原蛋白肽濾液，經噴霧干燥后研磨過100目標準篩，即可得到銀耳膠原蛋白肽粉末。