[發明專利]SIRT6的調節物及其篩選分析

有效

• 申請號: 201610086149.5
• 申請日: 2011-12-21
• 公開（公告）號: CN105713957B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 林合寧
• 申請（專利權）人: 康奈爾大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;G01N33/68;C07C225/06;C07K5/11;C07C327/42;C07K7/06
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 白華勝;段曉玲

一種鑒定Sirt6、PfSir2a或Sirt7去酰基酶活性調節物的方法，其中在Sirt6、PfSir2a或Sirt7使底物去酰基的條件下，在存在候選化合物的情況下將含有酰基?賴氨酸部分和指示物部分的脂肪?酰基化底物與Sirt6、PfSir2a或Sirt7接觸，其中所述酰基是疏水性脂肪酰基基團，其含有至少三個通過碳?碳鍵連接的碳原子的烴基；將所述去酰基化的底物與裂解試劑接觸，所述裂解試劑裂解所述賴氨酸與指示物部分之間的連接以產生可檢測的信號；且由此關聯定量的Sirt6、PfSir2a或Sirt7去酰基酶的活性。本申請還描述了Sirt6、PfSir2a或Sirt7去酰基酶活性的調節化合物，及其藥物組合物，通過給予所述調節化合物的治療方法，以及實施所述方法的試劑盒。

本申請是申請號為201180068116.3、申請日為2011年12月21日、發明名稱為“SIRT6的調節物及其篩選分析”的中國發明專利申請的分案申請，原申請為國際申請號為PCT/US2011/066480的國家階段申請，該國際申請要求申請日為2010年12月22日，申請號為61/426,231的美國臨時專利申請的優先權。

關于聯邦政府資助研究的聲明

本申請是在美國國立衛生研究院提供的合同號為GM086703的政府資助下進行。政府對本申請享有一定權利。

發明背景

去乙酰化酶(Sirtuin)是一類稱為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依賴性去乙酰基酶的酶。人類有七種sirtuin，Sirt1-7，其調控多種生物學過程，包括衰老、轉錄和代謝。因此，能夠調節sirtuin活性的小分子可以用于治療若干人類疾病。

在這七種人類sirtuin中，Sirt6特別重要，因為其作用為調控代謝和基因組的穩定性。Sirt6的生物學功能使其有望成為治療脂肪肝疾病、肥胖癥和糖尿病的靶點。因而，能夠活化、抑制或以其他方式調節Sirt6的小分子將在治療此類疾病和狀況中非常有益。

瘧疾寄生蟲惡性瘧原蟲含有兩個sirtuin，PfSir2a和PfSir2b。已知這些sirtuin調控致病基因的表達、抗原變異和抗原基因的表達，其有助于瘧疾寄生蟲逃避宿主免疫系統的檢測。因而，能夠抑制或以其他有益方式調節這些sirtuin的小分子能夠用于治療瘧疾，這也將是非常有益的。

Sirt6和PfSir2a抑制物的研發受到缺乏對Sirt6和PfSir2a有效的活性分析特別是能夠用于高通量篩選的方法的阻礙。研發有效的Sirt6和PfSir2a活性分析的這種困難主要是由Sirt6和PfSir2a的去乙酰基酶活性非常弱造成的。在這七種哺乳動物sirtuin中，Sirtuin 4-7具有較弱的或不具有去乙酰基酶活性。已知Sirt6的功能為是組蛋白H3K9-和H3K56-特異性去乙酰基酶，因為其他酰基肽不能被Sirt6水解。然而，去乙酰基酶的活性非常弱，迄今為止尚無k_cat和K_m檢測的報告。類似地，已知PfSir2a的去乙酰基酶活性比人Sirt1弱得多。

發明簡述

本申請發現了當賴氨酸上的酰基基本上是疏水的，特別是當酰基含有較高碳原子數(例如，至少5、6、7、8、9、10或更高的碳原子數)的烴基如長鏈烷基或烯基時，Sirt6是酰基-賴氨酸殘基的選擇性去酰基酶。Sirt6的這種選擇性活性與已知的其他sirtuin的選擇性形成鮮明對比。例如，Sirtuin 1、2和3已知具有強勁的去乙酰酶活性，而Sirtuin 5已知能夠容易地從賴氨酸殘基上除去丙二酰基、琥珀酰基和戊二酰基。相反地，本申請發現了與其去乙酰基酶活性相比，Sirt6明顯能夠更加有效地(例如，有效性超過30倍以上)從賴氨酸殘基上除去長鏈疏水性脂肪酰基。與Sirt6類似，人們發現PfSir2a和Sir7的去乙酰基酶活性也非常弱，但其能夠更高效地除去長鏈脂肪酰基。