[發(fā)明專利]一種布魯氏菌S2疫苗免疫抗體的檢測試劑及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610084616.0
• 申請日: 2016-02-06
• 公開（公告）號: CN105693831B
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王文龍;紅梅;呼和巴特爾;劉春霞;劉寧
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/23
• 分類號: C07K14/23;C12N15/31;C12N15/11;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發(fā)明提供一種家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA檢測試劑，所述IELISA檢測試劑的有效成分為布魯氏菌S2疫苗株基因GL_0002189編碼的抗原蛋白以及布魯氏菌BP26蛋白，或者它們的N端或C端融合有His標(biāo)簽的重組蛋白。本發(fā)明提供的IELISA檢測試劑能鑒別布魯氏菌主要流行株—羊種/牛種布魯氏菌及市場上普遍使用的主流疫苗—S2疫苗。因此，能夠在短時(shí)間內(nèi)鑒別家畜血清中疫苗免疫與羊種/牛種布魯氏菌自然感染抗體，解決免疫畜群中疫苗抗體干擾布病檢測和畜群凈化的難題。不僅可帶來,社會經(jīng)濟(jì)效益，而且可為凈化畜群中的布魯氏菌病做出貢獻(xiàn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程及免疫學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA檢測試劑。

背景技術(shù)

布魯氏菌病(brucellosis)是由布魯氏桿菌(brucella)引起的全世界范圍內(nèi)廣泛流行的人獸共患，OIE歸為乙類傳染病。布魯氏菌分七個(gè)種，牛種(B.abortus)、羊種(B.melitensis)、豬種(B.suis)、犬種(B.cains)、綿羊種(B.ovis)、森林鼠種布魯氏菌(B.neotomae)、海洋哺乳動(dòng)物布魯氏菌(B.meris)，羊種、牛種為主要流行病原種類，其中羊種毒力最強(qiáng)，危害最大。布魯氏菌病傳染方式為接觸患病動(dòng)物、未消毒的肉制品、乳制品，也可經(jīng)呼吸道、消化道及皮膚黏膜等組織器官侵入體內(nèi)引起感染。

布魯氏菌一旦進(jìn)入宿主體內(nèi)，細(xì)菌侵入血液和淋巴管，繁殖并被巨噬細(xì)胞吞噬。家畜感染布魯氏菌病常見的癥狀有母畜流產(chǎn)、公畜睪丸腫大、嚴(yán)重者肝臟和脾臟等內(nèi)臟腫大。家畜感染布魯氏菌多以淘汰為主，為此，嚴(yán)重影響了畜牧業(yè)的健康發(fā)展，而且威脅到了人類的健康。

近幾年來，我國布魯氏菌病的流行較為嚴(yán)重，已經(jīng)受到各級政府部門、科研工作者和廣大人民群眾的廣泛關(guān)注。傳統(tǒng)疫苗很難達(dá)到理想的保護(hù)免疫水平，并且目前的診斷方法無法辨別布魯氏菌疫苗免疫與自然感染，而近年來研究的一些鑒別診斷方法不能很好地在生產(chǎn)實(shí)踐中鑒別S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染，因此，很難做到在免疫畜群中凈化布魯氏菌自然感染病畜。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA檢測試劑。

本發(fā)明的另一目的是提供用于鑒別家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA檢測試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明針對市場上普遍使用的布魯氏菌主流疫苗—S2疫苗，對S2疫苗進(jìn)行全基因組測序及生物信息學(xué)分析。找出與羊/牛種布魯氏菌相比較S2疫苗株的特有基因，基因重組表達(dá)后，篩選出具有免疫原性的抗原蛋白，建立布魯氏菌S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA鑒別方法。

本發(fā)明首先提供GL_0002189抗原蛋白，其氨基酸序列如Seq ID No.1所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。該GL_0002189抗原蛋白由S2疫苗株基因GL_0002189(Seq ID No.2)編碼。

本發(fā)明還提供用于擴(kuò)增S2疫苗株基因GL_0002189的特異性PCR引物。

本發(fā)明還提供所述GL_0002189抗原蛋白在制備家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA檢測試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明中涉及的布魯氏菌自然感染是指羊種和/或牛種布魯氏菌自然感染。

本發(fā)明還提供一種鑒別家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的膠體金試紙條，所述試紙條上包被有GL_0002189抗原蛋白以及布魯氏菌BP26蛋白，或者它們的N端或C端融合有His標(biāo)簽的重組蛋白。

本發(fā)明還提供含有上述IELISA檢測試劑的家畜S2疫苗免疫與羊/牛種布魯氏菌感染的IELISA檢測試劑盒。