[發明專利]一種芭蕉半液體離體組培快繁方法

在審

• 申請號: 201610083786.7
• 申請日: 2016-02-10
• 公開（公告）號: CN105519446A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 蘇艷;楊寶明;瞿素萍;張藝萍;王繼華;王麗花;楊秀梅;張麗芳;許鳳
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所 53113
• 代理人: 康珉

技術領域

本發明屬于西貢蕉的組織培養技術領域，具體涉及一種西貢蕉的半液體快速 離體繁殖方法。

背景技術

芭蕉(MuSabasjoo)又名西貢蕉(MuSaabb)芭蕉科芭蕉屬植物，為食 用蕉之一。西貢蕉具有果形美，皮薄色鮮黃，果肉嫩滑，甜度適宜，商品 性好，具有耐瘠、耐旱、耐寒適應性強。抗香蕉葉斑病、束頂病、花葉心 腐病以及周年結果等特點，深受市場歡迎。在廣西、廣東、云南等地已廣泛種 植，取得了較好的經濟效益和社會效益，提高了蕉農種植西貢蕉的積極性，傳統 的種苗繁殖難以滿足市場上蕉苗的需求，隨著市場經濟的發展，其產品供應處 于緊俏的狀況。

此外芭蕉的生物學特性與香蕉不同，在離體培養上無法達到香蕉的繁殖效 果，褐變率高，增殖系數低，誘導芽分化時間長是制約芭蕉快速繁殖的主要原因， 難以進行規模化、標準化生產和大面積的推廣。因此探索一個快速有效的芭蕉的 繁育方法勢在必行。本發明探索將芭蕉進行半液體組培，建立一個有效的芭蕉苗 組織快速繁殖程序，以解決其外植體褐變率高和芽的增殖緩慢，生長周期長等技 術問題，從而達到快速繁殖芭蕉種苗，將芭蕉的半液體離體培養研究技術轉化為 現實生產力的目的。目前，還沒有對芭蕉進行半液體組培快繁的報道。

發明內容

為解決現有組培技術對芭蕉組培快繁存在外植體褐變率高、芽的增殖緩慢、 生長周期長的技術問題，本發明提供一種芭蕉半液體離體組培快繁方法，以滿足 芭蕉優質種苗的大規模生產需要。

本發明所提供的一種芭蕉半液體離體組培快繁方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和滅菌

①將無病蟲害的芭蕉植株吸芽在自來水下沖洗干凈，剝去外層老葉和枯葉 后，用質量分數為72％硫酸鏈霉素溶液浸泡預處理3小時，再將經預處理的吸芽 剝離為直徑為2～3cm，長3～4cm的牙尖；

②將牙尖在自來水下清洗干凈，在無菌條件下，用體積分數為70％酒精浸泡 30分鐘，再用質量分數為0.1％升汞溶液滅菌25分鐘，用無菌水沖洗5～6次， 再用無菌濾紙吸去表面水分；

③再將牙尖分割留下生長點及其周圍有4～5層葉鞘的切塊為外植體；

(2)誘導培養

將步驟(1)③所述外植體接種到半液體誘導培養基上，在溫度為28～30℃， 光照強度為1600～2000lx，光照時間為8h/d，每分鐘搖動30次的恒溫搖床培養 箱中，培養50天～60天，得到瘤狀芽體，所述半液體誘導培養基為：

MS培養液+6-BA4mg/L+NAA0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂 3g/L，pH5.6～5.8；

(3)增殖繼代培養

①將誘導培養獲得的瘤狀芽體分割為0.4cm×0.4cm～0.6cm×0.6cm帶芽體的 小塊，接種到固體增殖繼代培養基中，在培養溫度28～30℃，光照強度1600～ 2000lx，光照時間8h/d條件下培養25～30天，得到小苗，所述固體增殖繼代培 養基為：

MS培養液+6-BA3mg/L+NAA0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂 6.0g/L，pH5.6～5.8；

②將步驟(3)①培養得到小苗中苗高度小于3cm的小苗切割繼續轉接到步 驟(3)①中所述的固體增殖繼代培養基中，在步驟(3)①中所述的培養條件下 培養25～30天得到苗高達3cm以上的小苗；

(4)生根培養

將步驟(3)①和步驟(3)②培養得到的苗高達3cm以上的小苗接種到生根 培養基中，在溫度23～25℃，光照強度2000～2300lx，光照時間為8h/d的條 件下培養15～20天，得生根苗，所述生根培養基為：

MS培養液+NAA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂 6.0g/L，pH5.6～5.8。

本發明具有下列優點和有益效果：

1、本發明通過半液體恒溫搖床培養，有效減少了芭蕉的褐變率，顯著 提高吸芽的誘導分化率和增殖系數，解決了芭蕉外植體易褐變、褐變率高和芽的 增殖系數低，生長緩慢的技術問題，建立了一個有效的芭蕉組培苗快繁程序。本 發明技術方案，比常規固體培養方法縮短培養周期40～60天。減少了芭蕉的褐 變率，褐變率只占10％，常規培養褐變率達到70～80％，顯著提高吸芽的誘導分 化率。