[發(fā)明專(zhuān)利]B2M在作為卵巢癌治療靶點(diǎn)中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610083715.7
• 申請(qǐng)日: 2016-02-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105457030A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許國(guó)雄;孫文文
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): A61K45/00
• 分類(lèi)號(hào): A61K45/00;A61K48/00;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 馬偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及B2M在作為卵巢癌治 療靶點(diǎn)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

卵巢癌是女性生殖器官常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子 宮體癌而列居第三位。其病因不明確，可能與以下幾個(gè)方面有關(guān)：癌癥發(fā)病外 部因素(包括化學(xué)、物理、生物等致癌因子)，癌癥發(fā)病內(nèi)部因素(包括免疫 功能、內(nèi)分泌、遺傳、精神因素等)，以及飲食營(yíng)養(yǎng)失調(diào)和不良生活習(xí)慣等。 多發(fā)生于圍絕經(jīng)期的婦女。35歲以上者多發(fā)卵巢上皮性癌，而青年及幼年女性 多為生殖細(xì)胞類(lèi)惡性腫瘤。

Βeta-2-微球蛋白(B2M,beta-2-microglobulin)是主要組織相容性復(fù)合體 MHCI類(lèi)分子的輕鏈，它與重鏈(α-chain)以非共價(jià)鍵連接，位于幾乎所有有 核細(xì)胞的細(xì)胞膜上。另外，它還有游離形式，可以與膜上B2M相互轉(zhuǎn)換。游 離型B2M在多種腫瘤中被檢測(cè)到，包括乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌、口 腔癌、前列腺癌和睪丸癌，并且與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸和腫瘤的免疫治療相關(guān)。

siRNA，即小干擾RNA(SmallinterferingRNA)，有時(shí)也稱(chēng)短干擾RNA(Short interferingRNA)或沉默RNA(SilencingRNA)，是一段長(zhǎng)度為20-25個(gè)核苷酸的 雙鏈RNA分子。它主要通過(guò)與特定基因的mRNA堿基形成特異性結(jié)合并使之降 解，從而抑制該基因的表達(dá)(GeneKnock-down)。近年來(lái)，由于siRNA以其在極 低濃度下特異性的高效作用，它已經(jīng)成為在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中抑制特定基因表達(dá) 的有力工具，也越來(lái)越多地應(yīng)用于哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)基因功能的研究。

目前B2M在卵巢癌中的相關(guān)研究非常少，也沒(méi)有B2M抑制腫瘤細(xì)胞遷移、侵 襲的報(bào)道，同時(shí)尚未見(jiàn)使用siRNA高效抑制B2M表達(dá)而顯著抑制卵巢癌細(xì)胞增殖 等能力的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供B2M在作為卵巢癌治療靶 點(diǎn)中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供了B2M基因或蛋白的抑制劑在制備治療卵巢 癌的藥物中的應(yīng)用。

所述的抑制劑選自以B2M蛋白或其轉(zhuǎn)錄本為靶序列、且能夠抑制B2M蛋 白表達(dá)或基因轉(zhuǎn)錄的小干擾RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反義核酸； 或能表達(dá)或形成所述小干擾RNA、dsRNA、微小RNA、反義核酸的構(gòu)建物。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的抑制劑是序列如SEQIDNO.3和SEQID NO.4所示的siRNA。

在本發(fā)明的第二方面，提供了B2M基因或蛋白的抑制劑在制備抑制卵巢 癌細(xì)胞株增殖、遷移或侵襲的試劑中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的卵巢癌細(xì)胞株為OVCAR-3或SK-OV-3。

所述的抑制劑選自以B2M蛋白或其轉(zhuǎn)錄本為靶序列、且能夠抑制B2M蛋 白表達(dá)或基因轉(zhuǎn)錄的小干擾RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反義核酸； 或能表達(dá)或形成所述小干擾RNA、dsRNA、微小RNA、反義核酸的構(gòu)建物。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的抑制劑是序列如SEQIDNO.3和SEQID NO.4所示的siRNA。

在本發(fā)明的第三方面，提供了一種治療卵巢癌的siRNA分子，所述的 siRNA分子序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：

1、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)敲低B2M后可顯著抑制卵巢癌細(xì)胞株的增殖、遷移和侵襲， 表明針對(duì)卵巢癌B2M高表達(dá)的病人給予降低B2M的處理存在潛在的治療效 果，證實(shí)了B2M是一種潛在的治療卵巢癌的新型靶點(diǎn)，具有很大的臨床應(yīng)用 價(jià)值。

2、本發(fā)明設(shè)計(jì)了可顯著敲低B2M表達(dá)的siRNA分子，取得了預(yù)料不到 的技術(shù)效果。

附圖說(shuō)明

圖1.siRNA的敲除效果檢測(cè)。A.OVCAR-3中的敲除效果檢測(cè)；B.SK-OV-3 中的敲除效果檢測(cè)。

圖2.B2M對(duì)卵巢癌細(xì)胞株增殖的影響。A和C：OVCAR-3；B和D： SK-OV-3。**P<0.01。

圖3.B2M對(duì)卵巢癌細(xì)胞株遷移和侵襲能力的影響。A和B，細(xì)胞劃痕實(shí) 驗(yàn)；C和D，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。*P<0.05。

具體實(shí)施方式