[發(fā)明專利]PD?1基因重組病毒質(zhì)粒及構(gòu)建、重組逆轉(zhuǎn)錄病毒Lenti?PD?1?Puro及包裝與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610083007.3
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105671083B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設計）人: 孫昌秀
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽柯頓生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/01;C12N15/12;A61K35/768;A61P35/00
• 代理公司: 合肥國和專利代理事務所(普通合伙)34131
• 代理人: 孫永剛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)及細胞治療的技術(shù)工程領(lǐng)域，具體涉及一種PD-1基因重組病毒質(zhì)粒，命名為病毒質(zhì)粒KGEN-0626，于2016年1月27日保藏于位于中國武漢武漢大學的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO：V201601，本發(fā)明還涉及重組逆轉(zhuǎn)錄病毒Lenti-PD-1-Puro的包裝及在利用該重組病毒對腫瘤細胞進行免疫治療中的應用。

背景技術(shù)

癌癥已超過心臟疾病，成為全球第一大死亡原因。癌癥治療在過去幾十年中取得了可喜的進展。腫瘤治療除了外科手術(shù)外，還包括化療、放療及靶向藥物治療。盡管這些方法在一定程度上控制了癌癥的發(fā)展，但其缺乏特異性，會在殺死腫瘤細胞的同時殺死正常細胞，此外這些藥物治療毒性大，嚴重損傷了正常免疫系統(tǒng)，影響病人的生存質(zhì)量。

PD-1(Programmed Death 1)程序性死亡受體-1：是一種重要的免疫抑制分子。最初是從小鼠T細胞雜交瘤2B4.11克隆出來。PD-1抑制療法是通過解除腫瘤逃避免疫系統(tǒng)能力的新型免疫治療方法。癌細胞逃避免疫殺傷的一種機制，是通過它的表面產(chǎn)生一種稱為程序性死亡配體-1(PD-L1).當這種PD-L1聯(lián)接到一類免疫細胞T細胞的PD-1蛋白上即引起T細胞失活。T細胞就不能夠發(fā)現(xiàn)腫瘤向免疫系統(tǒng)發(fā)出攻擊腫瘤的信號。

該免疫治療方法的設計思路是，針對腫瘤患者T細胞上的PD-1基因鎖定或基因敲除，將使患者T細胞上的PD-1與腫瘤細胞表面的PD-L1不產(chǎn)生聯(lián)接，從而激活患者自身的T細胞功能，達到殺死腫瘤細胞的目的。

目前美國已經(jīng)有抗PD-1藥物的臨床實驗，證明了這種機理治療癌癥成效顯著。2014年施貴寶公司研制的Opdivo(PD-1抑制劑Nivolumab)先后在日本和美國上市，而默沙東公司研制的Keytruda(PD-1抑制劑Pemboolizamab)則是第一個在美國上市的用于晚期轉(zhuǎn)移皮膚黑色素瘤(Melanoma)的抑制劑，該PD-1抑制劑在這些皮膚黑色素瘤晚期轉(zhuǎn)移病人的臨床實驗中，被發(fā)現(xiàn)持續(xù)性地抑制腫瘤，大大提高病人的存活時間和存活率(60％的病人存活超過兩年)。更令人振奮的病例發(fā)生在紐約斯隆.凱特琳癌癥紀念研究中心(Memorial Sloan Kettering Cancer Center,MSK)的黑色素瘤病人的治療反應。一位患有轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的49歲女患者，左胸下有一巨大有蒂的壞死性腫瘤。在進行一個劑量的試驗性結(jié)合免疫治療3周后，腫瘤消失了。此文發(fā)表在4月20號新英格蘭雜志(NEJM)上。與此同時，MSK的Paul Chapman博士報道，其有效率達22％(74個病人中有16個治療后未再發(fā)現(xiàn)腫瘤存在)。

另外，晚期非小細胞性肺癌(NSCLC)和肝癌(Hepatocellular Cancer)治療中亦取得相當好的效果。在2015年第5屆美國臨床腫瘤年會(ASCO)中(5月29日至6月2日在美國芝加哥召開)，美國南加州大學Norris大學癌癥中心Anthony B.EL-Khoueiry教授報導在一項I/II期研究成果表明Nivolamab治療晚期肝癌是安全有效的。42名患者有8名患者(19％)腫瘤縮小30％，12個月總存活率為62％，最長達17個月，而目前市場上最新藥物索拉菲尼(一種FDA批準的晚期肝癌治療藥物-多靶點酪氨酸激酶抑制劑)，客觀腫瘤緩解率只有2％的患者有效，總生存率為10-11個月。施貴寶公司亦公布了Opdivo(Nivolumab)的試驗數(shù)據(jù)，在對582位患者臨床試驗中，使用標準化療法，四期肺癌患者生存期為9.4個月，而使用Nivolumab藥物治療，患者平均生存期提高到12.2個月，有的甚至到19.4個月。是常規(guī)標準化療的近2倍。另外，默沙東的Keytruda(Pemboolizumab)是美國首個獲批的抗PD-1藥物，用于惡性黑色素瘤及非小細胞性肺癌。另外在臨床試驗中，對胃癌(Gastric Cancer)的有效率達53％的患者腫瘤縮小。食管癌(Esophageal Cancer)患者52％腫瘤縮小，頭頸部腫瘤(Head and Neck Cancer)57％的腫瘤縮小。

綜上所述，PD-1抗體藥物治療腫瘤療效顯著。然而目前國內(nèi)尚無PD-1抗體，PD-1抗體治療藥物仍在研發(fā)之中，尚未進入臨床試驗。另外，PD-1抗體制備及純化過程復雜，周期長，制造成本高，造成抗體藥物昂貴，事實上普通百姓是難于承受這種高昂的治療費用。

有鑒于此，我們發(fā)明了一個PD-1重組病毒的制備方法，并利用此重組病毒進行腫瘤的免疫細胞治療。