[發明專利]龍須菜多糖的應用

在審

• 申請號: 201610082951.7
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105535013A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 康亞妮;趙小東;邵志峰;謝東升
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A61K31/715
• 分類號: A61K31/715;A61K36/896;A61K36/90;C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及一種大型海藻來源的作為細胞凋亡誘導劑 的龍須菜多糖及其在抗腫瘤中的應用，具體涉及一種以紅藻龍須菜中提取并純化的 多糖，其具有促使細胞凋亡誘導相關基因FADD和GADD的表達上調，并最終誘 導腫瘤細胞凋亡的作用。

背景技術

從研制創新藥物角度出發，海洋藥物的研究是開發以傳統中藥為來源的新型天 然活性藥物的熱點及重要方向之一。大型海藻龍須菜(Gracilariopsislemaneiformis) 為紅藻門、真紅藻綱、杉藻目、江蘺科、江蘺屬，主要分布于我國山東、遼寧、江 蘇、福建、海南等沿海地區。龍須菜性味甘，主要入肝經，具有助消化、解積膩、 清腸胃和止血降壓、軟堅化痰、清熱利水、溫經止痛的功效。龍須菜富含活性多糖、 藻紅蛋白及膳食纖維和營養元素等，具有免疫調節活性、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒 等多種生物學活性和藥用保健功效。龍須菜多糖作為海洋藥物資源，具有良好抗腫 瘤效果，同時沒有明顯的毒副作用，這種雙重作用有利于腫瘤病人的綜合治療和康 復，適于聯合用藥，值得進一步研究和開發成藥用多糖或保健品多糖，以提高龍須 菜的經濟利用價值。

腫瘤細胞的無限增殖性是腫瘤的顯著特征之一。中醫理論認為癌癥的產生可能 是由于機體陰陽失衡導致。細胞增殖與死亡類似于中醫的陰陽消長，這種陰陽消長 平衡被打破是導致癌癥發生的原因之一。細胞凋亡是正常細胞死亡的重要途徑之 一，但是在很多腫瘤組織中，細胞凋亡往往會失去控制，腫瘤的發生發展與細胞凋 亡失控密切相關。細胞凋亡是很多抗癌藥物的靶點。參與細胞凋亡調控的蛋白有很 多，Fas相關死亡結構域蛋白(Fasassociateddeathdomain，FADD)是死亡受體途 徑中重要的一類轉接蛋白，它可以將Fas/FasL結合后的凋亡信號傳導到下游蛋白， 激活Caspase8并導致下游Caspase3和Caspase6級聯反應，從而引起細胞凋亡。另 一方面，當細胞受到外界因素損傷時，生長阻滯和DNA損傷基因(growtharrestand DNAdamagegene，GADD)被誘導高表達，進而通過上調P21、P27、P57等DNA 損傷修復有關基因，活化P38和JNK通路有效促進細胞凋亡。這為治療腫瘤新型 藥物的研制開發提供了新思路，也豐富了中醫藥扶正抗癌的理論，為我國傳統中醫 藥進一步用于腫瘤的治療提供理論依據。

鑒于龍須菜是一種容易獲得且生長快的海洋藻類資源，為了充分利用這種藻類 資源，本領域的技術人員致力于進一步開拓其生物活性物質的用途。

發明內容

為了進一步開拓龍須菜多糖的用途，本發明提供了龍須菜多糖在制備用于誘導 細胞中的FADD和GADD基因的表達的制劑中的應用。

進一步地，上述方法中的龍須菜多糖的制備方法為：利用三氯乙酸法從龍須菜 (Gracilariopsislemaneiformis)中提取，包括以下步驟：

1)用水溶解龍須菜干粉，并用NaOH調節溶液pH至9-11，離心獲得第一上 清液和第一沉淀；

2)在步驟1)中離心得到的第一沉淀中加入水溶解，并用NaOH調節溶液pH 至9-11，并再次離心，獲得第二上清液；

3)合并第一上清液和第二上清液，并加入三氯乙酸進行沉淀，離心獲得第三 上清液；

4)在第三上清液中加入無水乙醇進行沉淀，離心獲得第二沉淀；

5)用丙酮洗滌第二沉淀，并冷凍干燥，獲得粗提龍須菜多糖；

6)將步驟5)中的粗提龍須菜多糖溶于水，通過離子交換柱進行分步洗脫， 真空干燥后獲得純化的龍須菜多糖。優選地，離子交換柱為DEAESephadexA-25 離子交換柱；用蒸餾水、0.3mol/LNaCl和1.2mol/LNaCl溶液進行分步洗脫；分 步洗脫后獲得3種級分，將最顯著的級分作為純化的龍須菜多糖進行后續實驗。

優選地，步驟1)和步驟2)中，用NaOH調節溶液pH至10。

進一步地，步驟3)中加入的三氯乙酸的質量濃度為2％-5％。優選三氯乙酸的 質量濃度為3％。

進一步地，上述應用中的龍須菜多糖的單糖成分為D-半乳糖和3,6-內醚半乳 糖。

優選地，上述D-半乳糖含量為25％-30％，所述3,6-內醚半乳糖含量為 27％-34％。