[發明專利]融合蛋白210及其在優化病毒復制中的應用

有效

• 申請號: 201610081938.X
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN107043426B
• 公開（公告）日: 2020-01-24
• 發明（設計）人: 王曉佳;李翠翠
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N7/00
• 代理公司: 11002 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王文君

本發明提供一種融合蛋白210及其在優化病毒復制中的應用，該融合蛋白210為P60蛋白的截短體，其保留了P60促進多種病毒復制的功能，且在有效作用的濃度范圍內，對細胞不會產生毒性作用。可在較廣譜的范圍內(0.0001?0.1MOI)提升病毒效價2個數量級單位，有利于對病毒的鑒定檢測，可檢測彈狀病毒科VSV，黃病毒科HCV，微小病毒科EV71等，檢測耗時縮短了一半以下。通過原核表達系統獲得的融合蛋白210表達效率較高，且易于純化，一步純化效率可達85％以上，蛋白終濃度可達3mg/ml。因此，可通過將融合蛋白210直接加入病毒培養基中，在較低滴度條件下，檢測培養多種病毒分離株，簡便快捷，本發明在病毒學科的產、學、研等諸多方面均具有重大的影響和意義。

技術領域

本發明涉及病毒的分離鑒定及全病毒疫苗制備領域，具體地說，涉及一種融合蛋白210及其在優化病毒復制中的應用。

背景技術

對病毒的鑒定檢測是培養大量病毒，進行病毒學實驗以及制備疫苗和特異性診斷試劑的先決條件。建立病毒檢測的新技術基本上應從3個方面考慮,即對病毒抗原的檢測、對病毒產生抗體的檢測和對病毒基因的檢測。對病毒抗原和病毒抗體的檢測通常需要ELISA檢測試劑盒；對病毒基因的檢測需要利用實驗室分子手段，如PCR技術和基因芯片技術進行鑒定。目前這兩種檢測方法存在一定的局限性，ELISA檢測操作比較繁瑣，靈敏性有待提高；PCR技術和基因芯片技術也存在類似的情況。

此外，許多病毒學實驗室經常遇到的技術瓶頸是，很多病毒(如腸道病毒以及某些新發現病毒)很難甚至根本無法在常用細胞系內增殖，以至于很多病毒學試驗無法跟進，也因此直接影響后續研究。因此，如何不通過遺傳改造法，提高病毒復制力，是病毒學科領域面臨的重大挑戰之一。

目前全病毒疫苗制備領域也面臨相似的難題，很多疫苗用毒株效價不高，這直接影響著疫苗的效果與價格。國內外一些研究小組嘗試在病毒培養過程中通過多次換液以降低細胞對病毒的防御影響(如干擾素濃度)；還有研究者嘗試將不同細胞系的貼壁細胞改良成懸浮細胞，以通過增加單位體積的細胞密度，提升細胞增殖病毒的效價滴度。這些方案一定程度上提高了病毒的效價滴度，然而皆屬于外部因素的改造，而且操作繁瑣，并沒有通過深入了解病毒復制的宿主因素，從根本上發現并開發有利于病毒復制的細胞調節蛋白。

細胞核仁蛋白P60，是膠質瘤抑癌候選基因2(Glioma tumor suppressorcandidate region gene 2,GLTSCR2)編碼蛋白，可調節腫瘤抑制因子P53與PTEN的穩定性，在腫瘤學領域，P60擁有“腫瘤抑制因子”及“抑制癌癥的路障”雙重身份。P60獨特的生化特性與復雜功能使之迅速成為科研熱點，但是在病毒學領域鮮有報道。

前期的研究發現，P60蛋白對幾種病毒(彈狀病毒科VSV，黃病毒科HCV，微小病毒科EV71)的復制具有促進作用，但細胞毒性實驗顯示P60全蛋白可誘導顯著的細胞凋亡，且細胞毒性較明顯。

發明內容

本發明的目的是提供一種融合蛋白210，其為P60蛋白的截短體。

本發明的另一目的是提供融合蛋白210在優化病毒復制中的應用。

為了實現本發明目的，本發明首先提供一種新型的融合蛋白210，其氨基酸序列如Seq ID No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本發明還提供編碼所述融合蛋白210的基因，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示。

本發明還提供含有編碼所述融合蛋白210基因的載體或工程菌。

本發明融合蛋白210的制備方法包括以下步驟：