[發明專利]抗腫瘤小分子多肽PIDDΔ及其載體和應用

在審

• 申請號: 201610081404.7
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105524161A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 季俐俐;張睿;馮健
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/85;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐激波

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體是一種抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ及其載體和 應用。

背景技術

目前，肺癌的發病率和死亡率均居癌癥之首，是對人群健康和生命威脅最大的惡 性腫瘤之一。在中國，由于吸煙人數的快速上升，大氣污染的日趨嚴重等因素，近年來肺癌 發病率和死亡率一直呈明顯攀升趨勢。盡管近幾年肺癌治療包括化療有了長足的進步，但 是預后仍然不容樂觀。過去25年肺癌患者化療后的5年生存率仍未見顯著提高，僅為 15%。因此，加強治療肺癌的研究，探索新的治療途徑具有十分重要的意義。

多肽藥物是目前生物醫藥領域最具成長性的嶄新領域，以其高效、安全、特異性強 等特點逐漸用于癌癥，傳染病等預防和治療?；虻墓δ茏罱K要通過其表達產物——蛋白 質來實現，生物體的一切活動或功能都離不開蛋白質的物質基礎。發現和鑒定具有重要功 能的蛋白質，可為新藥的開發帶來決定性的影響。并且多肽類藥物具有分子量小，在人體內 不結存，無副作用，免疫原性小，活性好等優點成為一個研究的熱點。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的在于提供一種抗腫瘤小分 子多肽PIDD^Δ，其具有抑制肺癌細胞增殖的功效。本發明的另一目的是提供一種能表達上述 抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ的載體。本發明還有一目的是提供上述抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ的 應用。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

所述的抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ的編碼基因，其DNA序列如SEQIDNO.2所示。

含有所述的抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ的編碼基因的載體。

所述的載體，將抗腫瘤小分子多肽PIDD^Δ的編碼基因克隆到pCMV-HA真核表達載體 構建而成。

所述小分子多肽PIDD^Δ在制備抗肺癌藥物中的應用。

本發明人的前期研究結果表明，PIDD可以通過與Keap1分子相互作用，導致促癌信 號通路Nrf2的激活，進而上調多藥耐藥蛋白MRP1的表達，促進肺癌細胞的耐藥存活。因此， 阻斷內源性PIDD與Keap1相互作用，便可抑制Nrf2信號通路的激活，進而抑制腫瘤細胞的生 長及腫瘤細胞的增殖等作用。

有益效果：與現有技術相比，本發明具有如下的優點及效果：本發明提供的抗腫瘤 小分子多肽能特異性結合Keap1，阻斷細胞內源性PIDD與Keap1相互作用，抑制Nrf2信號通 路激活，達到抗腫瘤的效果，在抗腫瘤藥物制備中具有廣泛的應用。

附圖說明

圖1是載體質粒pCMV-HA的結構示意圖；

圖2是多肽PIDD^Δ重組真核表達載體酶切鑒定結果圖；

圖3是免疫印跡檢測重組多肽PIDD^Δ的表達結果圖；

圖4是CCK-8實驗檢測306aa多肽PIDD^Δ對H1299細胞活性的抑制結果圖；

圖5是PI染色流式細胞術檢測306aa多肽PIDD^Δ抑制肺癌細胞進入S期圖；

圖6是克隆形成實驗檢測306aa多肽PIDD^Δ抑制H1299細胞增殖結果圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。實施例中未注明具體條件的實驗 方法，通常按照常規條件，例如分子克隆實驗指南（第三版，J.薩姆布魯克等著，黃培堂等 譯，科學出版社，2002年）中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件進行。

實施例1：306aa多肽PIDD^Δ重組

1）重組肽的克隆載體構建