[發明專利]一種C-肽定量測定試劑盒

在審

• 申請號: 201610081311.4
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105652018A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 陸建斌
• 申請（專利權）人: 廣州科方生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 李健富

技術領域

本發明屬于糖尿病的輔助診斷技術領域，具體涉及人體血清或尿液中C-肽定量測 定的試劑盒。

背景技術

糖尿病是由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用障礙所致的以高血糖為特征的代謝 性疾病。C-肽是胰島β細胞的分泌產物，它與胰島素有一個共同的前體——胰島素原。一個 分子的胰島素原經酶切后，裂解成一個分子的胰島素和一個分子的C-肽。在使用胰島素治 療的糖尿病病人中，胰島素的測定會受到外源性胰島素和外周循環抗體的干擾。但進行胰 島素治療的病人所檢測到的胰島素抗體對C-肽沒有顯著干擾。C-肽從人體產生后，不被肝 細胞所攝取，主要在腎臟代謝并從腎臟排出體外。C-肽無生物活性，也不與細胞膜上的受體 結合，且不被降解C-肽的測定方法是比胰島素本身更為可靠的指示胰島素分泌水平的方 法。另外，對于應用外源性胰島素的測定，由于C-肽與胰島素抗體無交叉反應，不受胰島素 抗體干擾，外源性胰島素又不含C-肽，故C-肽測定顯得更為重要，從而了解胰島β細胞功能 情況，對于指導治療有積極作用。

目前臨床上用于測定C-肽的方法主要有放射免疫分析、酶聯免疫分析、時間分辨 熒光免疫分析和化學發光免疫分析等。放射免疫分析受方法本身工作原理的限制，其靈敏 度及抗干擾能力差，存在放射線輻射和污染等問題，已基本上退出市場。而酶聯免疫分析受 方法學的限制，特異性和靈敏性有待提高，一般作為初篩，現階段還不能作為定性、定量手 段。時間分辨熒光免疫分析進行超微量分析的時候，會受到激發光的雜散光影響，進而導致 靈敏度受到限制。化學發光免疫分析較其它分析方法高靈敏度、高特異性、操作方便、線性 范圍廣、分析快，是現階段的主流分析方法。而找到一種新的、能替代化學發光免疫分析的 技術方法也是至關重要的。

發明內容

本發明采用磁性分離技術與免疫反應結合，通過采用吖啶酯或吖啶磺酰胺或磺酰 胺衍生物作為標記物，提供一種高靈敏度、高特異性、操作方便、線性范圍廣、分析快速的C- 肽定量檢測試劑盒。檢測樣本既可以是離體血清，也可以是離體尿液，檢測結果準確可靠， 且該C-肽定量測定試劑盒在制備過程中添加有防腐劑，使得該試劑盒保存年限久。

本發明提供的利用化學發光磁性微粒免疫檢測技術，通過雙抗體夾心法定量檢測 人血清或尿液中C-肽含量的試劑盒，能快速檢測血清或尿液中C-肽含量，且檢測結果具有 很高的靈敏度和特異性。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案如下：

一種C-肽定量測定試劑盒，其特征在于：包括抗C-肽抗體包被的磁性微粒、吖啶酯 標記的抗C-肽抗體；

所述抗C-肽抗體包被的磁性微粒包括帶有羧基或對甲苯磺酰基的磁性微粒、抗C- 肽抗體、包被緩沖液、保存液、封閉液；

所述吖啶酯標記的抗C-肽抗體由標記物、抗C-肽抗體、標記緩沖液、保存液制備而 成；所述標記物為吖啶酯或吖啶磺酰胺或吖啶磺酰胺衍生物中的任意一種。

優選地，所述帶有羧基的抗C-肽抗體包被的磁性微粒還包括活化劑和偶聯劑，所 述帶有羧基的抗C-肽抗體包被的磁性微粒的制備方法如下：

1)配制所述包被緩沖液、封閉液、保存液、活化劑、偶聯劑；

2)抗C-肽抗體預處理：取所述抗C-肽抗體用超濾離心管進行離心，棄掉濾液，往濃 縮的抗體中加入包被緩沖液，繼續離心，重復4-6次，然后將離心管倒置離心，濃縮收集抗體 備用；

3)制備抗C-肽抗體包被的磁性微粒：取所述帶有羧基的磁性微粒用包被緩沖液清 洗4-6次，磁分離去除上清液，加入活化劑和偶聯劑，用漩渦混合器充分混勻懸浮磁性微粒， 反應30-40min；再用包被緩沖液清洗4-6次，磁分離架上去除上清液，添加步驟2)預處理過 的抗C-肽抗體，添加包被緩沖液，在25℃下，用漩渦混合器旋轉包被15-20小時；反應完成后 用包被緩沖液清洗4-6次，磁分離去除上清液，加入封閉液，在25℃下，用漩渦混合器旋轉包 被4-5小時，最后用保存液清洗4-6次，用保存液稀釋后，2-8℃保存。

優選地，所述帶有甲苯磺酰基的抗C-肽抗體包被的磁性微粒還包括催化劑，所述 帶有甲苯磺酰基的抗C-肽抗體包被的磁性微粒的制備方法如下：

1)配制所述包被緩沖液、封閉液、保存液、催化劑；