[發明專利]一種鑒定定位于白菜A03染色體的根腫病抗性QTL的InDel分子標記及其應用

在審

• 申請號: 201610080876.0
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105543391A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 汪維紅;于拴倉;蘇同兵;張鳳蘭;余陽俊;張德雙;趙岫云;盧桂香
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張如佳

技術領域

本發明涉及生物技術領域中鑒別大白菜根腫病抗性的分子標記及其應用，特別涉 及與蕓薹根腫菌2號和7號生理小種抗性相關的InDel分子標記及其應用。

背景技術

十字花科植物根腫病是鞭毛菌亞門蕓薹根腫菌(PlasmodiophorabrassicaeWoron) 侵染引起的一種土傳真菌病害,是十字花科植物的重要根部病害。該病最早發現于 1737年英國地中海西岸和歐洲南部。目前，在歐洲、北美和亞洲的日本等地已成為一 種主要病害,給十字花科蔬菜生產造成了嚴重的威脅,現全世界均有分布,尤以溫帶地 區發生更為嚴重。近年來,十字花科根腫病在我國的東北地區、西南地區、長江中上游 地區以及山東青島等地迅速擴大,危害十分嚴重,嚴重制約著我國十字花科蔬菜產業的 發展。

我國自1955年首次發現根腫病以來，現已擴散至全國各地。據不完全統計，僅大 白菜在全國的發病面積已超過200萬畝，且危害面積逐年增加。自從1931年報道了根 腫菌存在小種分化后，各國學者利用根腫菌對不同寄主的抗感反應，劃分出不同的生 理小種，目前在國際上比較公認的有Williams和歐洲鑒別系統(ECD)。2009年，沈向 群等率先采用Williams鑒別系統對采自遼寧、吉林、山東和四川等15個地區的根腫 菌進行了鑒定，認為11個地區的根腫菌主要以4號生理小種為主，同時發現2、7、 10和11號生理小種各一個。國內關于采用歐洲ECD鑒別系統的研究還未見報道，其 原因主要是國內尚無完整的ECD鑒別寄主。根腫病雖然可采用化學藥劑和加強栽培管 理等防治方法，但防治效果并不理想。選育和種植具有持久抗性的品種，是防治大白 菜根腫病最經濟有效的措施。

近年來迅速發展起來的分子標記輔助選擇(Maker-assistedseleetion，MAS)技術 為分子育種提供了嶄新的途徑。這種技術的基本原理是利用與目標基因緊密連鎖或表 現共分離關系的分子標記對選擇個體進行目標區域以及全基因組篩選，從而減少連鎖 累贅，獲得期望的個體，達到提高育種效率的目的(DudleyJWetal.,1993； Melchingeretal.,1990)。迄今，共有8個抗根腫病基因定位于大白菜不同連鎖群 (Hiraietal.，2004；Piaoetal.，2004；Suwabeetal.，2006；Hayashidaetal.， 2008；Sakamotoetal.，2008)。Piao等(2004)利用兩個側翼標記TCR01和TCR09， 將對根腫病生理小種2、4和8表現抗性的CRb基因定位于A03連鎖群，標記間的遺 傳距離為2.9cM。2個側翼標記同時應用可以顯著提高選擇的準確性，并且共顯性標 記TCR01能夠準確鑒定出純合抗性植株(Piao等，2007)。樸鐘云等(2010)以具有抗 根腫病基因CRb的大白菜‘CRShinkiiDH’為抗源，通過連續多代選擇篩選出全部 恢復‘BJN3’基因組的9株近等基因系。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何鑒別大白菜是否為抗根腫病的大白菜。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種鑒別大白菜根腫病抗性的分子標記，該 分子標記在大白菜A03染色體上，由201個核苷酸組成，其核苷酸序列如SEQIDNo. 1的第32-232位所示。

本發明根據上述鑒別大白菜根腫病抗性的分子標記還開發了特異引物對，由正向 引物和反向引物組成。

上述正向引物為如下a1)或a2)：

a1)SEQIDNo.2所示的單鏈DNA分子。

a2)將a1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得 到的、與a1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子。

上述反向引物為如下b1)或b2)：

b1)SEQIDNo.3所示的單鏈DNA分子。

b2)將b1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得 到的、與b1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子。

其中，上述一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變為所述單鏈DNA分子3’末端 堿基之外一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變。

本發明根據上述鑒別大白菜根腫病抗性的分子標記還開發了一種鑒別或輔助鑒別 大白菜是否為抗根腫病大白菜的方法。