[發明專利]利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法及應用方法

在審

• 申請號: 201610080864.8
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105641749A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 韓斌;張誠;張旭
• 申請（專利權）人: 北京賽爾泰和生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，包括以下步驟：

從新鮮牛眼球上切取角膜片后，并將角膜片浸泡在低滲溶液中；

由角膜片上得到包含前彈力層和部分基質層的牛角膜基質，將其反復凍 融，以使細胞破碎；

依次采用緩沖液對牛角膜基質進行漂洗、以及將其放入脫細胞試劑中進 行浸泡后，采用超純水對其進行沖洗；

將牛角膜基質放入另一種脫細胞試劑中進行浸泡后，再次采用超純水對 牛角膜基質進行沖洗；

將牛角膜基質放入脫水劑中進行浸泡后，采用鈷-60對牛角膜基質進行輻 照后，將所制備的牛角膜基質放干燥保存。

2.根據權利要求1所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，其 特征在于，上述方法的具體步驟如下：

S1、取12小時內的新鮮牛眼球，用生理鹽水沖洗干凈后，用顯微角膜環 鉆切取200～500微米的角膜片，將其放于低滲溶液中浸泡30～60分鐘；

S2、用手術刀刮掉角膜片的上皮層，保留前彈力層，撕掉后彈力層和內 皮層，得到包含前彈力層和部分基質層的牛角膜基質，將其反復凍融使細胞 破碎；

S3、依次采用緩沖液對牛角膜基質漂洗2～3次、以將其放入脫細胞試劑 浸泡15～90分鐘，再采用超純水對其進行沖洗2～3次；

S4、將牛角膜基質放入另一種脫細胞試劑浸泡15～30分鐘后，再采用超 純水對其進行沖洗2次；

S5、將牛角膜基質放入脫水劑中進行浸泡3～6小時后，采用劑量為 5～15KGy的鈷-60對牛角膜基質輻照1～5小時后，將所制備的牛角膜基質放置 于無水氯化鈣中干燥保存。

3.根據權利要求2所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，其 特征在于，在步驟S1中，低滲溶液為濃度為0.3％～0.5％的NaCl溶液。

4.根據權利要求2所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，其 特征在于，在步驟S2中，將牛角膜基質冷凍1或3小時，并解凍15～60分鐘， 以使牛角膜基質的細胞破碎。

5.根據權利要求2所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，其 特征在于，在步驟S3中，緩沖液為100mmTris-HCl緩沖液，其pH值為7.5；

脫細胞試劑采用濃度為3-5g/L的碳酸氫鈉溶液。

6.根據權利要求2所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，其 特征在于，在步驟S4中，另一種脫細胞試劑采用濃度為0.6‰～1.8‰的次氯酸 鈉溶液。

7.根據權利要求2所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法，其 特征在于，在步驟S5中，脫水劑采用體積比為70％或80％的甘油脫水劑。

8.根據權利要求2或7所述的利用新鮮牛角膜以制備牛角膜基質的方法， 其特征在于，在步驟S5中，將牛角膜基質放于質量指標符合HG/T2765-2005 標準的硅膠干燥劑中干燥保存。

9.一種利用新鮮牛角膜以制備的牛角膜基質的應用方法，其特征在于， 該牛角膜基質采用權利要求1或2所述的制備方法制備而成，在對其應用前 采用PBS浸泡10分鐘復水后，即可在手術中使用。