[發明專利]一種用作豬肺炎支原體疫苗的重組蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201610080055.7
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105524148B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 丁紅雷;付啟歡;王博;王豪舉
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C07K14/30
• 分類號: C07K14/30;C12N15/31;C12N15/70;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 重慶志合專利事務所(普通合伙) 50210
• 代理人: 胡榮琿

本發明提供了一種用作豬肺炎支原體疫苗的重組蛋白，所述重組蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO：1。本發明還提供了上述重組蛋白的制備方法和應用。本發明的重組蛋白可用于制備豬支原體肺炎的預防性藥物，本發明的重組蛋白具有良好的免疫原性和反應原性，免疫保護效果達到87.5％，可以作為一種良好的疫苗預防豬支原體肺炎；同時本發明的重組蛋白可低成本的大規模生產具有良好的市場前景。

技術領域

本發明屬于生物技術制藥領域，具體涉及一種可用作豬肺炎支原體疫苗的重組蛋白，本發明進一步涉及該重組蛋白的制備方法及其應用。

背景技術

豬支原體肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）又稱豬喘氣病或豬氣喘病，是由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一種慢性、接觸性傳染病，通過呼吸道在豬只和豬群之間傳播，是豬場最常見的疫病之一。該病通常不引起豬的死亡，但會使其出現發熱、咳嗽、呼吸困難等癥狀，造成食欲減退、生長阻滯、飼料轉化率降低、上市時間延遲。本病一旦傳入豬群，很難徹底清除，且該病通常與其他病毒或細菌引起豬呼吸系統疾病綜合征（Porcine respiration disease complex, PRDC）。根據流行病學資料，該病廣泛分布于包括發達國家在內的世界各地。在我國有超過95%的豬場均為Mhp血清陽性[He Y, Xu MJ, Zhou DH, et a1. Seroprevalence of Mycoplasma hyopneumoniae inpigs in subtropical southern China [J]. Trop Anim Health Prod, 2011, 43 (3):695-698. ]。因此，Mhp是一種在我國廣泛存在，長期危害養豬業并造成巨大損失的病原菌之一。

該病用抗菌藥物防控必須長期給藥，不僅增加了飼養成本也易使感染菌株產生耐藥性。目前上市的Mhp疫苗包括滅活苗和弱毒苗。滅活苗能夠降低肺部病理損傷，提高日增重，激發機體的體液免疫，但幾乎不產生細胞免疫，也不能阻止Mhp感染[Sibila M, BernalR, Torrents D, et al. Effect of sow vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae on sow and piglet colonization and seroconversion, and pig lunglesions at slaughter [J]. Vet Microbiol, 2008,127(1-2): 165-170.]和在豬群間的傳播[Meyns T, Dewulf J, de Kruif A, et al. Comparison of transmission ofMycoplasma hyopneumoniae in vaccinated and non-vaccinated populations [J].Vaccine, 2006, 24(49-50): 7081-7186./Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, et al.The effect of vaccination on the transmission of Mycoplasma hyopneumoniae inpigs under field conditions [J]. Vet J, 2011, 188(1): 48-52.]。我國江蘇省農科院研發了豬支原體肺炎弱毒活疫苗(168株)。該疫苗能有效激發機體的細胞免疫和局部粘膜免疫[周勇岐, 趙永前. 豬支原體肺炎(168株)活疫苗的作用機理與應用[J]. 中國牧業通訊, 2008, 10: 49-52]。但需要采用肺內注射的方式，操作難度大，因此這種疫苗推廣難度大。Mhp苛刻的培養條件和培養時容易被其他細菌和支原體污染也使得上述兩種疫苗成本較高。因此，研發新型、有效、低成本的基因工程亞單位Mhp疫苗就成為防治豬支原體肺炎的重要手段。