[發明專利]鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的方法

在審

• 申請號: 201610079692.2
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105651680A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 李洲;范維佳;劉曉華;黃慧玲;么秀華;孫雪蓮;朱建民;李召雨;魏華英;劉江;周洪銳;李昀地;楊延瑞
• 申請（專利權）人: 關節動力安達（天津）生物科技有限公司;天津中新科炬生物制藥有限公司;天津市神經外科研究所
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 天津市鼎和專利商標代理有限公司 12101
• 代理人: 崔繼民

1.一種鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的方法，其特征在于， 以標有磁珠的淋巴細胞CD3抗體為指標，用流式細胞儀檢測分析CD3+陽性細 胞百分含量,并用歸一法算出相對百分比,比較不同強度的磁體分離器分選 多人血液淋巴細胞的分離效果，以達到選取所需磁場的分離器來分選各種細 胞。

2.根據權利要求1所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取肝素抗凝全血加至聚苯乙烯管中，先加入CD3細胞正選試劑盒自 帶的紅細胞裂解液,再依次加入CD3細胞正選試劑盒中的分選緩沖液和提前預 混過的磁性粒子，室溫孵育；

(2)加入磁珠分選介質定容，放入待測的細胞分離器的磁體中進行分選, 棄去上清液，重復步驟(2)；

(3)用PBS緩沖液重懸細胞，即得到人淋巴細胞中CD3+細胞；

(4)陰性對照、未分選細胞及分選后細胞分別加入抗人CD3抗體，混合 均勻，避光孵育，離心棄上清，細胞用體積比濃度為1％多聚甲醛固定，4℃避 光，使用流式細胞分析儀檢測CD3細胞比例；

(5)采用BDFACSDiVa軟件分析T淋巴細胞CD3+陽性細胞百分含量,并 采用歸一計算方法，算出不同人血液中CD3+陽性細胞的相對百分含量,以比 較各種磁體分選不同人血液淋巴細胞的能力，從而選擇出所需磁場的分離器用 于分選細胞。

3.根據權利要求2所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，所述步驟(2)中放入待測的細胞分離器的磁體中進行分 選，分選采用手動方式，將磁體和試管一起上下傾倒10s，回到直立位置靜置 5min。

4.根據權利要求2所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，所述步驟(2)中放入待測的細胞分離器的磁體中進行分 選，分選采用機械旋轉方式，將磁體和試管一起旋轉1000r2min靜置3min。

5.根據權利要求2所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，所述步驟(2)中磁珠分選介質為含1mmol/LEDTA，2％FBS 的0.01mol/LPBS緩沖液，百分數為體積比。

6.根據權利要求2所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，所述CD3細胞正選試劑盒為stemcell公司的CD3細胞正 選試劑盒。

7.根據權利要求2所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，所述步驟(2)中重復步驟(2)為3次。

8.根據權利要求2所述的鑒定不同免疫磁珠細胞分離器分選細胞效率的 方法，其特征在于，所述流式細胞分析儀為BD_FACSCanto_II型流式細胞分析 儀，激光波長為488nm，發射波長為525nm。