[發(fā)明專利]一種鑒別苦蘵的核苷酸序列、特異性引物和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610079591.5
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105505928B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王慧中;馮尚國;姜夢瑩;焦凱麗;史鈺軍
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州科興生物化工有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 杜軍

本發(fā)明涉及一種鑒別苦蘵的核苷酸序列、特異性引物和方法。本發(fā)明鑒別苦蘵的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于鑒別苦蘵的特異性引物上游序列ST3KZF：如SEQ ID NO.2所示；下游序列ST3KZR：如SEQ ID NO.3所示。利用特異性引物ST3KZF/ST3KZR，通過常規(guī)PCR方法來鑒別苦蘵。本發(fā)明樣品用量少，僅需少量樣品就可以完成整個(gè)操作；準(zhǔn)確、靈敏度高，ST3KZF/ST3KZR為苦蘵特異性擴(kuò)增引物，若為其他酸漿屬植物種類，為陰性反應(yīng)；方法簡便，采用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測，耗時(shí)短，3～5小時(shí)即可完成。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于利用分子生物學(xué)方法鑒別苦蘵的技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種鑒別苦蘵的核苷酸序列、特異性引物及其方法。

背景技術(shù)

苦蘵(Physalis angulata L.)，為茄科(Solanaceae)酸漿屬(Physalis)一年生草本植物，分布于世界熱帶與亞熱帶地區(qū)，常生于海拔500～1500米。在我國主要分布于華東、華中、華南及西南等地。作為傳統(tǒng)藥材，幾個(gè)世紀(jì)以來，苦蘵以果、根或全草入藥，可用于多種疾病的治療，早在秦漢時(shí)期的《爾雅》中就有記載，很多中藥材地方志中均有對其描述。其性味苦、寒，主治咽喉腫痛、腮腺炎、急慢性氣管炎、肺膿瘍、痢疾、小便不利和外用治膿泡瘡等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明苦蘵主要有醉茄內(nèi)酯、酸漿苦素、黃酮、生物堿及甾醇等化學(xué)成分，其中酸漿苦素和谷甾醇具有多種體內(nèi)外的抗癌活性，對于宮頸癌和皮膚癌都具有明顯療效。另外，苦蘵果實(shí)中的多糖對超氧陰離子自由基和二苯代苦味自由基起抗氧化作用，苦蘵提取液具有抗菌消炎、降血糖、降血脂等療效。

苦蘵與小酸漿P.minima、酸漿P.alkekengi及毛酸漿P.pubescens等其他酸漿屬植物的形態(tài)學(xué)特征非常相似(包括莖、葉、花及果實(shí)等特征)，因此，利用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類方法很難將苦蘵與其他酸漿屬相似植物快速準(zhǔn)確的鑒別開。所以，在過去，將其他酸漿屬植物誤認(rèn)為苦蘵進(jìn)行使用的情況經(jīng)常發(fā)生，這為苦蘵藥材資源的安全使用和保護(hù)帶來了困難。

隨著生物科學(xué)的發(fā)展，DNA分子標(biāo)記技術(shù)彌補(bǔ)和克服了傳統(tǒng)鑒別方法的一些缺陷和難題，已經(jīng)成為了植物輔助鑒別的重要手段。本申請人運(yùn)用目標(biāo)起始密碼子多態(tài)(startcodon targeted Polymorphism,SCoT)分子標(biāo)記方法，對苦蘵及其他一些酸漿屬植物進(jìn)行DNA指紋圖譜研究，從中篩選出苦蘵特異性DNA片段，通過TA克隆、測序等方法，設(shè)計(jì)發(fā)明了特異性引物，應(yīng)用于苦蘵的鑒定，為有效的鑒別和保護(hù)苦蘵藥材資源提供有效的分子技術(shù)依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種鑒別苦蘵的核苷酸序列。

本發(fā)明用于鑒別苦蘵的特征性核苷酸序列來源于SCoT通用引物3(5’-CAACAATGGCTACCACCG-3’)擴(kuò)增所得的苦蘵特異性DNA片段，具體序列為：