[發明專利]一種山羊角蛋白抗體的制備方法

有效

• 申請號: 201610078878.6
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105601738B
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 周旸;鄭海玲;趙豐;汪自強;劉劍;王淑娟;龍博;楊海亮
• 申請（專利權）人: 中國絲綢博物館
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及文物考古技術領域，公開了一種山羊角蛋白抗體的制備方法，包括：A）角蛋白提取；B）抗原制備、免疫、血液收集；C）抗血清分離；D）抗體的制備。本發明方法制備的山羊角蛋白抗體對山羊角蛋白的反應靈敏度高，所需使用的抗原量極少。

技術領域

本發明涉及文物考古技術領域，尤其涉及羊毛制品文物檢測領域。

背景技術

山羊粗毛可造毛筆、馬鬃尾制刷之類，而山羊絨具有細、輕、柔軟、滑糯、保暖性優良等特點，是一種貴重的紡織原料。

中國古代在北方地區山羊毛織品廣泛應用于服飾和毛毯，而在南方地區山羊毛多用于毛筆、刷制品。中國歷史悠久，從中國早期的墓葬中出土有大量的羊毛制品，出土的大量山羊毛制品對研究古代社會環境和人文活動具有重要參考價值。

對山羊毛制品的鑒定主要是對山羊角蛋白的鑒定。山羊毛角蛋白是一種硬化，不易溶解的蛋白質，其中既有含羧基等在內的酸性基，也有含胺基，亞胺基等在內的堿性基，所以在酸、堿、鹽、氧化劑、還原劑、鹵素等中羊毛都具有一定的不穩定性。這對山羊毛制品的鑒別造成了一定困難。

目前，蛋白質檢測技術如基于抗原-抗體結合的酶聯免疫技術是一種廣泛用于文物檢測的先進技術，而前期的羊毛羊角蛋白抗體制備是一大難題。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種山羊角蛋白抗體的制備方法。本發明方法制備的山羊角蛋白抗體對山羊角蛋白的反應靈敏度高，所需使用的抗原量極少。

本發明的具體技術方案為：一種山羊角蛋白抗體的制備方法，步驟如下：

A）配制6-8wt%的一硫酸氫鉀水溶液，用飽和氫氧化鈉溶液將一硫酸氫鉀水溶液的pH調節為3.5-5；接著按1:（50-65）的浴比將山羊毛添加到溶液中，在30-35℃下水浴震蕩0.5-1.5h；然后取出羊毛并水洗至中性；將羊毛加入到其60-100倍質量的混合溶液A中，在95-105℃下反應3.5-4.5h后過濾，得到粗角蛋白溶液，將粗角蛋白溶液透析、冷凍干燥后制得山羊角蛋白粉。

本發明方法提取制得的山羊角蛋白粉，純度高，復配成抗原液后效果好。

B）用生理鹽水將上述制得的山羊角蛋白粉配制成0.75-1.25mg/mL的角蛋白溶液，將角蛋白溶液與Quick Antibody-Rabbit 5W佐劑按體積比1:(0.8-1.1)混合，得到免疫抗原液，使用免疫抗原液對兔子進行皮下多點注射，進行初次免疫；在初次免疫后的第3、5周時，使用免疫抗原液對兔子進行皮下多點注射，進行加強免疫；在進行初次免疫后的第7、9周時，使用免疫抗原液對兔子進行皮下多點注射，進行再加強免疫；當兔子血樣中的抗體效價達到 1:20000 時，收集兔子血液。

本發明使用的Quick Antibody-Rabbit 5W佐劑無毒無害，不含蛋白質成分，不破壞抗原天然構型，而且免疫方式簡單，無需乳化抗原，只需要簡單混合即可免疫，同時免疫周期短，抗原用量少。

C）從上述收集的血液中分離得到抗血清。

D）將蛋白A填料與磷酸鹽緩沖溶液混合，攪拌后抽真空 20-25min，得到無氣泡的蛋白A填料液；將蛋白A填料液在無氣泡條件下加入到玻璃柱中，得到蛋白柱；對蛋白柱進行清洗；對上述制得的抗血清進行稀釋，稀釋后加入到蛋白柱中進行上樣，重復上樣一次；對蛋白柱再次清洗，用甘氨酸溶液對抗體進行洗脫，洗脫后清洗蛋白柱，制得抗體。

本發明采用山羊角蛋白制備而得的抗體具有較強的特異性，該抗體能夠與山羊角蛋白具有明顯的免疫反應，靈敏度高，能夠對古代山羊毛制品中已經斷裂的山羊角蛋白分子做出檢測。

作為優選，驟A）中的所述混合溶液A由亞硫酸氫鈉、尿素、十二烷基苯磺酸鈉和水組成；其中亞硫酸氫鈉的濃度為6wt %，尿素的濃度為6M，十二烷基苯磺酸鈉的濃度為1 wt%。