[發明專利]一種vWF活性保護液

在審

• 申請號: 201610077438.9
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN105622747A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 楊篤才;梁小明;何淑琴;楊智;劉宇良;匡青芬
• 申請（專利權）人: 江西博雅生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C07K14/755
• 分類號: C07K14/755;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/18
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 薛端石

技術領域

本發明涉及一種從人血漿冷沉淀提取凝血因子Ⅷ的廢料中提取人血管性血友病因子的制 備工藝，特別涉及一種vWF活性保護液，屬于生物制藥領域。

背景技術

vWF是一種具有多聚體的血漿糖蛋白，其分子量從250kDa到2千萬kDa不等，形成血 漿中已知的最大分子量可溶性蛋白。血漿中小分子量vWF主要是二聚體形式，分子量約 500kDa。大小不等的多聚體，對維持vWF正常生物活性具有重要意義。

血漿vWF在原發性止血中起著重要作用，其負責血小板與受損傷血管表面的粘附，并因 此形成血小板栓子，有助于纖維蛋白交聯的形成。另外，血漿vWF起著凝血因子VIII的運 輸劑和穩定劑的作用。

血管性血友病(vWD)是最常見的遺傳性出血性疾病，患者vonWillebrand因子(von Willebrandfactor，vWF)基因突變或調控異常導致血漿vWF數量減少或質量異常。vWD臨 床特征主要為皮膚黏膜出血，2N型和3型患者還可發生與血友病A相似的關節腔出血和肌 肉血腫。據國外報道，vWD發病率(2.3～11.0)/10萬人口，一般認為在遺傳性出血性疾病 中，vWD居第二位。

臨床上vWF的活性用瑞斯托霉素輔因子活性(vWF:RCo)來表征，主要用于治療先天性、 獲得性血管性血友病(vWD)，一般以20～60UvWF:RCo/kg劑量來給藥。

研究表明冷沉淀中富含vWF等凝血因子類物質。在血漿原料日趨緊缺的今天，通過冷沉 淀來制備vWF，對冷沉淀的綜合利用，節約稀缺血漿資源，提高市場競爭力具有重大意義。

現有技術中，較早的工藝使用vWF的抗體偶聯到瓊脂糖凝膠上，通過免疫親和層析純化 vWF，但其抗體制備周期長，凝膠載量低，不適合作大規模制備，如《Purificationofvon WillebrandFactorsolutionsusinggelpermeationchromatography》(UP4774323)。

有專利用DEAEFractogelTSK650M(Merck)純化vWF因子組分，純度高，但是工藝 比較復雜，需要兩步離子交換和一步親和層析，如《Processforanindustrial-scalepreparationof astandardizedhumanvonWillebrandfactorconcentrateofveryhighpurityandsuitablefor therapeuticuse》(US5408039)。也有報道CHT層析結合PH5.4酸沉淀分離vWF組分的， 其比活不高，且酸沉淀去除纖維結合蛋白的同時，可能影響vWF的生物學活性，如《Production ofavonwillebrandfactorprepartionhavingagreatspecificactivity》(US20070135619A1)。

另外還有一些工藝用EMDFractogelTMAE(Merck)來純化VIII/vWF因子復合物，但 是都無法單獨得到高純度的vWF，治療針對性不強，如《具有止血活性的含有vWF的制劑 及其制備方法》(CN1425024A)，《AProcessforrecoveringahigh-purityvirus-inactivatedfactor VIIIbyanionexchangerchromatography》(US5714590)。

還有一些公司用基因重組的方法(猴腎細胞或CHO細胞)純化vWF，他們通過陰離子 交換層析法從動物細胞培養液中進行提純，但是由于動物原性抗原的存在，人體對其可能有 排斥作用，如《MethodforisolationofhighlypurevonWillebrandFactor》(US5854403)。

另有采用兩步層析法純化制備vWF的報道，但其純度不高，比活相對較低，僅50IU/mg， 如《ProcessformanufacturingvonWillebrandfactor》(US5252710)。

可見，現有的的vWF純化工藝仍存在一些問題：(1)制備周期長，不適應于大規模制 備，尤其是采用免疫親和層析法純化時，其抗體制備周期長，凝膠載量低。(2)VIII/vWF 復合物產品在較難控制工藝穩定性；(3)重組方法所得vWF產品可能存在異質抗原；(4) 分離純化工藝繁瑣。