[發(fā)明專利]一種檢測致病性犬鉤端螺旋體的PCR引物及試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610077204.4 | 申請日： | 2016-02-03 |
| 公開（公告）號： | CN105624301A | 公開（公告）日： | 2016-06-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 曹永國;丁壯;龔悅;金雪敏;張文龍;吳殿君 | 申請（專利權(quán)）人： | 吉林大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 130062 吉林省長春市西安大*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 致病性 犬鉤端 螺旋體 pcr 引物 試劑盒 | ||
1.一種檢測致病性犬鉤端螺旋體的PCR引物，其特征在于，所 述引物如下：
上游引物：5’-CTTGGGATTCTTCTAATMCSGATA-3’；
下游引物：5’-GATCCTTGTATTCCACCGATG-3’。
2.權(quán)利要求1所述的引物在制備檢測致病性犬鉤端螺旋體的試 劑盒方面的應(yīng)用。
3.含有權(quán)利要求1所述的引物的試劑或試劑盒。
4.一種檢測致病性犬鉤端螺旋體的試劑盒，其特征在于，所述 試劑盒包括：權(quán)利要求1所述的PCR引物、陽性對照、陰性對照、Taq 酶、dNTP、10×Buffer、ddH2O。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照的 構(gòu)建方法為：
1)以56608菌株的基因組DNA作為模板，利用權(quán)利要求1所述的 引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化回收，與pMD18-T進(jìn)行連接；
2)向Trans1-T1克隆感受態(tài)中加入步驟1)獲得的連接產(chǎn)物，篩選 陽性克隆，提取質(zhì)粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的工 作程序為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸 30s，29個循環(huán)；72℃延伸5min。
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