[發明專利]一種提高草莓植株抗旱能力的方法

有效

• 申請號: 201610076880.X
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN107034222B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 金萬梅;李茂福;王華;楊媛;劉佳棽
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/74
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.rty基因在提高草莓抗旱能力中的應用，其特征在于，所述rty基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種提高草莓植株抗旱能力的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將草莓的組培苗浸入攜帶rty基因和選擇標記基因的農桿菌菌液中侵染3-6分鐘；

(2)將組培苗移至再生培養基上培養；

(3)將組培苗移至分化培養基上培養，獲得抗性芽；

(4)抗性芽在生根培養基上生根后煉苗、移栽，得到轉基因草莓植株；

(5)采用PCR法對含有目標基因rty的陽性轉基因植株進行檢測；

其中，所述rty基因同權利要求1中所述。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中草莓組培苗的制備方法為：采草莓匍匐莖上的芽，用水沖洗后，放入0.1％的升汞中處理4-6分鐘，然后用無菌水沖洗3-6次，吸干芽上的殘留水分后，將芽接種到初代培養基上，培養10-12天后，芽開始萌發，待長成2-4cm大的組培苗，將組培苗移至繼代培養基上培養生長30-35天，取伸展葉片剪成葉盤，準備侵染。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(1)中攜帶rty基因和選擇標記基因的農桿菌菌液的制備方法為：

1)構建植物表達載體pBI121-rty：將rty基因克隆到T-easy載體上，構建載體T-rty，然后用內切酶Xba I和Sac I分別雙酶切載體T-rty和pBI121，將T-rty酶切后回收的小片段與pBI121酶切后回收的大片段，在連接酶的作用下構建得到植物表達載體pBI121-rty；

2)農桿菌轉化：用pBI121-rty轉化根癌農桿菌LBA4404，28±2℃下在含100mg·L^-1卡那霉素的LB液體培養基中培養15-16小時后，用MS液體培養基繼續培養2-4小時，待菌液OD₆₀₀為0.3-0.5時用于侵染；

其中，初代培養基為：MS基本培養基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1瓊脂粉、1.0mg·L^-16-芐基腺嘌呤和0.2mg·L^-1吲哚丁酸，pH5.6；

繼代培養基為：MS基本培養基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1瓊脂粉、0.2mg·L^-1 6-芐基腺嘌呤和0.1mg·L^-1吲哚丁酸，pH5.6。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中將侵染后的組培苗去除多余菌液，接種至再生培養基上，28±2℃暗培養2-3天；

再生培養基為：MS基本培養基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1瓊脂粉、3.0mg·L^-1 6-芐基腺嘌呤和0.1mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸，pH5.6。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中將經過再生培養后的組培苗轉接在分化培養基上，28±2℃暗培養10-12天，然后在25±2℃、光周期16小時光照/8小時黑暗、光照強度25-35μmol·m^-2·s^-1下培養30-40天，獲得抗性芽；

分化培養基為：MS基本培養基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1瓊脂粉、400mg·L^-1頭孢霉素、7.5mg·L^-1卡那霉素、3.0mg·L^-1 6-芐基腺嘌呤和0.1mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸，pH5.6。