[發明專利]一種抗人淀粉樣β肽的納米抗體及其應用

有效

• 申請號: 201610076553.4
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105542005B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 徐麗;劉紅靜;賈凌云;王從剛;任軍
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;A61K39/395;A61P25/28;G01N33/68
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

本發明公開了一種新的抗人淀粉樣β肽(Aβ)的納米抗體及其應用。本發明利用噬菌體展示技術對羊駝噬菌體抗體庫進行多輪篩選富集具有Aβ特異性的噬菌體，通過對噬菌體培養制備抗體，并且鑒定獲得陽性克隆，通過測序獲得其相應的編碼序列，然后在大腸桿菌中表達獲得可溶性的抗體片段。本發明的抗體具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。本發明提供的抗體對Aβ具有特異的結合能力，可應用于以Aβ為靶標的疾病的治療和診斷藥物或試劑的制備。

技術領域

本發明屬于生物化學與分子生物學領域，涉及一種抗人淀粉樣β肽(amyloidβ,Aβ)的納米抗體及其應用。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是進行性認知功能障礙和行為損害為特征的中樞神經系統變性疾病。2015年9月Alzheimer’s disease international,(ADI)的報告數據顯示：目前約每3.2秒就有一人罹患老年癡呆，在老年癡呆患者中60-70％為阿爾茨海默病性癡呆，隨著老齡人口基數和比例的持續增加，AD帶來患者個人的痛苦和社會、家庭的壓力將越來越嚴重。

淀粉樣β肽(amyloidβ,Aβ)是存在于人腦的天然產物，其在神經細胞發育(Heo C,et al.J Neurochem.2007；102(2):493-500.)、睡眠調節(Kang JE,et al.2009；326(5955):1005-7)、抗菌(Soscia SJ,et al.PLoSOne 2010；5:e9505.)等方面發揮積極的調節作用。但遺傳學分析發現Aβ前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)(Goate A,etal.Nature.1991；349(6311):704-6；Jonsson T,et al.Nature.2012；488(7409):96-9)或與其代謝相關的基因如早老素發生突變與家族性AD的是否發生相關(Kamino K,etal.Neurosci Lett.1996；208(3):195-8；Sherrington R,et al.Nature.1995；375(6534):754-60.)，因此人們認為Aβ肯定與AD的發生相關。在AD發生過程中自由Aβ經歷先增加后減少的過程(Maia LF,et al.EMBO Mol Med.2015；7(7):895-903.)，可能正是由于Aβ的代謝失衡，Aβ在某種未知條件的誘導下逐漸聚集形成可溶的Aβ聚集體以及不溶的Aβ纖維沉積。

動物模型研究和臨床實驗均發現普通抗體都可以在一定程度上干擾Aβ的代謝，但在緩解AD病情發展方面沒有獲得理想的結果。仔細分析治療過程發現，其治療機理主要是通過藥物與血液內Aβ的結合打破血液與腦脊液Aβ的平衡，促使腦脊液內Aβ跨越血腦屏障進入血液；或者是通過抗體跨越血腦屏障起到直接治療效果，但實際所用藥物主要是IgG類抗體，血液內極低的Aβ水平和抗體難于跨越血腦屏障的缺陷，大大限制了其治療效果(BardF,et al.Exp Neurol.2012；238(1):38-43.)。

為了提高抗體跨越血腦屏障的能力，目前通常對抗體進行包埋修飾或將靶標抗體與具有跨血腦屏障能力的蛋白(腦血管內皮細胞相關抗原抗體或具有特殊轉胞吞作用的蛋白)構建成嵌合體。無論哪一種策略，都進一步增加了抗體的制備成本。而分子量較小(12-15kD)等電點較高(pI>9.2)的來自駝科動物重鏈抗體可變區的納米抗體在不進行任何修飾的條件下可以非常高效的跨越血腦屏障(Li T,et al.FASEB J.2012；26(10):3969-79.)，因此納米抗體在腦疾病治療中具有很好的應用前景；另外，獲得的納米抗體和普通抗體一樣可以用于以Aβ為靶標的診斷、檢測與治療。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種抗淀粉樣β肽的納米抗體。