[發(fā)明專利]一種大櫻桃快繁方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610076532.2
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105638479A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫玉剛;魏國芹;孫楊;付全娟;楊興華
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省果樹研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 朱云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種大櫻桃快繁方法。

背景技術(shù)

櫻桃屬于薔薇科落葉喬木果樹，是中國北方落葉果樹中繼中國櫻桃之后果實(shí)成熟最早的果樹樹種，因此，早有“春果第一枝″的美譽(yù)。在調(diào)節(jié)鮮果淡季，均衡周年供應(yīng)和滿足人民生活的需要方面，有著特殊的作用。大櫻桃果實(shí)含有較豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，對人的身體有一定的營養(yǎng)價(jià)值。中醫(yī)藥學(xué)認(rèn)為，大櫻挑具有調(diào)中補(bǔ)氣，祛風(fēng)濕的功能。大櫻桃管理用工少，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟(jì)效益高，適宜在遼寧、山東、陜西、河南、河北等地栽培。

隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，植物細(xì)胞具有“全能性”得到了廣泛證實(shí)，因此，在離體的條件下用離體的方法培養(yǎng)花藥，人為的改變小孢子的發(fā)育途徑，使其配子體發(fā)育途徑終止，轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育，通過器官發(fā)生或胚發(fā)生的途徑，形成完整的植株。關(guān)于大櫻桃花粉離體培育的報(bào)道很少，且誘導(dǎo)率、成活率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對目前的問題，提供一種大櫻桃快繁方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種大櫻桃快繁方法，包括，

1)花蕾采集保存：于晴天在大櫻桃植株花序上采取無病蟲、生長良好的單核發(fā)育早期的適齡花蕾一株或多株，將取好的花蕾迅速用冰盒保存；

2)花藥消毒：將步驟1中保存在冰盒內(nèi)的花蕾在超凈工作臺(tái)上浸入70-75％濃度的酒精中消毒10-15s，快速取出立即浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒8min以上，在消毒過程中輕輕晃動(dòng)燒杯使其消毒充分，最后用無菌水沖洗多次后放在濾紙上吸干花蕾表面水分；

3)剝?nèi)』ɡ僦械幕ㄋ帲缓髮內(nèi)〉幕ㄋ幗臃N愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，置于搖床上進(jìn)行培養(yǎng)，使其在搖動(dòng)的過程中花粉自然地散落于培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10-20天，挑出花藥壁，繼續(xù)培養(yǎng)，獲得愈傷組織；

4)接種分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)獲得試管小苗；

5)接種生根培養(yǎng)基，篩選獲得單體植株。

優(yōu)選地，所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA0.8mg/L+ZT0.6mg/L+NAA0.4～0.6mg/L+甘氨酸1.1mg/L+鹽酸硫胺素1.2mg/L+煙酸0.7mg/L+瓊脂1000～2000mg/L+蔗糖20～30g/L+酵母提取物2000～3000mg/L，在18-20℃、光照強(qiáng)度為1800LX、光照時(shí)間8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述的分化培養(yǎng)基為3/4MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5～0.7mg/L+7％蔗糖，在20-22℃、光照強(qiáng)度為2000LX、光照時(shí)間12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1～0.3mg/L+NAA0.3～0.5mg/L+瓊脂40～60g/L+蔗糖2000～3000mg/L+維生素B11～3mg/L+活性炭質(zhì)量比0.1％～0.3％+酵母提取物5000～7000mg/L，在23-25℃、光照強(qiáng)度為2200LX、光照時(shí)間為15小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)。

優(yōu)選地，還包括煉苗移栽，具體為待長5條以上根時(shí)開瓶煉苗4～6d，將瓶內(nèi)苗取出，用0.003％～0.005％質(zhì)量比IAA溶液浸苗根基部5～8min，將組培苗移栽到基質(zhì)中，澆足定根水，蓋上小拱棚膜保溫保濕，前期溫度保持在15～20℃，濕度80～90％，7～15d后揭膜，逐步延長揭膜時(shí)間，直至不覆膜，每隔2～3周澆施0.1％～0.3％重量比尿素和0.1％～0.3％質(zhì)量比KH₂PO₄或稀薄糞水，將成活苗移栽；所述的基質(zhì)為：腐葉土∶珍珠巖∶蛭石＝2∶2∶1體積比。

優(yōu)選地，揭膜期間平均溫度保持15℃～25℃，濕度保持80％～95％。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用大櫻桃花藥為外植體，調(diào)整去花藥的時(shí)期，進(jìn)行花藥愈傷組織的誘導(dǎo)，采用光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)相結(jié)合的方法交替培養(yǎng)，獲得花粉植株。本發(fā)明培養(yǎng)基愈傷組織增殖明顯，易形成花粉植株。關(guān)鍵是找到了適宜的培養(yǎng)方法，用本發(fā)明的方法對大櫻桃的離體花粉進(jìn)行培養(yǎng)，具有花粉萌發(fā)成胚時(shí)間短、加倍效率高、產(chǎn)量大及較容易獲得優(yōu)良變異育種中間材料等優(yōu)點(diǎn)，在育種材料提純復(fù)壯、種質(zhì)資源創(chuàng)新、多倍體育種及花粉發(fā)育進(jìn)程研究等方面內(nèi)容，具有較大的實(shí)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

下面對本發(fā)明的較佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)闡述，以使本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征能更易于被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，從而對本發(fā)明的保護(hù)范圍做出更為清楚明確的界定。

本發(fā)明實(shí)施例包括：

實(shí)施例一：一種“早大果”大櫻桃快繁方法，包括，