[發(fā)明專利]一種固定化脂肪酶催化合成綠原酸植物甾醇酯的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610075915.8
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105524968A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發(fā)明（設計）人: 高玉梅;王志慧
• 申請（專利權）人: 常州可賽成功塑膠材料有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種固定化脂肪酶催化合成綠原酸植物甾醇酯的方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）選取200～300g干燥后的玉米，將其研磨，過100～120目篩得玉米粉末，將玉米粉末加入5L反應釜中，并向反應釜中加入總質(zhì)量5～8%復合酶，再按固液比1:10～1:15加入質(zhì)量濃度15%鹽酸溶液，混合攪拌均勻，將反應釜升溫至45～60℃，進行酶解3～5h，將酶解液過濾取濾渣，所述的復合酶是按質(zhì)量比3:2的纖維素酶和蛋白質(zhì)酶進行混合；

（2）將上述得到的濾渣用榨汁機榨出多余水分，將榨完后的濾渣用超臨界CO₂在室溫下進行萃取，萃取壓力為5～20MPa，二氧化碳流量為160～180kg/h，萃取1～2h后，從流體相中分離得到甾醇固體，留取，備用；

（3）取50～60g菊花花瓣，先粉碎過60～80目篩，再將粉末置于300～500mL質(zhì)量分數(shù)85%乙醇溶液中，攪拌后移入超聲提取裝置中，在60～65℃和80～120W下進行提取2～3h，得提取液，將提取液在4000～5000r/min轉速下離心分離，取上清液，將上清液移入圓底燒瓶中，用旋轉蒸發(fā)儀在50～55℃下蒸發(fā)濃縮至乙醇完全去除，將濃縮液轉移到分液漏斗中，按體積比1：2加入石油醚進行脫色2～3次，分層得水相，再用乙酸乙酯萃取3～5次，取下層液體，即為綠原酸；

（4）取2～3g步驟（2）的甾醇于250mL錐形瓶中，按固液1:2～1:6向瓶中加入上述綠原酸，攪拌混合后再加入總質(zhì)量4～10%固定化脂肪酶為催化劑、0.1～0.3g二十六烷為內(nèi)標和40～50mL甲醇為溶劑，將錐形瓶放入恒溫振蕩器中，在40～65℃和80～120r/min下進行酯化反應3～5h；

（5）將上述酯化反應后的混合物按體積比1:5～1:8溶于正己烷中，用硅膠柱層析分離，分離后收集洗脫液，并在65～70℃進行旋轉蒸發(fā)，得到綠原酸甾醇酯濃縮液，將濃縮液在45～55℃下干燥6～8h得到綠原酸甾醇酯粉末狀固體。