[發明專利]利用人的尿液細胞構建軟骨組織的方法

在審

• 申請號: 201610075027.6
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105624102A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 米格爾·埃斯特班;米奇·托托雷拉;王東業;陳樹翰;秦寶明
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 華輝

1.一種利用人尿液細胞體外制備人工體外來源的軟骨組織的方法，包括如下步驟：

(1)將人尿液細胞經a)重編程生成誘導多能干細胞，并定向分化為間充質干細胞；或 經b)轉分化生成間充質干細胞；

(2)在軟骨誘導分化培養基中培養(1)獲得的間充質干細胞，得到人工體外來源的軟 骨組織。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述a)中將人尿液細胞經重編程生成誘導多 能干細胞的方法為：1)將轉錄調控因子導入尿細胞或在含有小分子化合物的培養基中 培養尿細胞；2)重編程產生iPS細胞克隆；3)挑取單克隆，繼續培養獲得誘導多能干 細胞。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述a)中將尿液細胞來源的誘導多能干細胞 定向分化為間充質干細胞的方法為：1)在微孔板中將尿液細胞來源的誘導多能干細胞 分化形成類胚體；2)類胚體懸浮培養分化為中胚層細胞；3)分化為中胚層細胞的類胚 體貼壁培養在含誘導因子bFGF，EGF和PDGF的含血清或無血清培養基中分化為間充質 干細胞。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述b)將人尿液細胞經轉分化生成間充質干 細胞的方法為：1)將轉錄調控因子導入尿細胞或在含有小分子化合物的培養基中培養尿 細胞；2)誘導產生前體iPS細胞克隆；3)轉染后第17天，挑取單克隆，使克隆繼續增 殖6天；4)換MSC培養基培養9天后細胞得以擴增進行第一次傳代。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述軟骨誘導分化培養基為無血 清特定培養液。

6.由權利要求1-5中任一條的方法得到的軟骨細胞或軟骨組織及其應用。

7.一種誘導多能干細胞獲得間充質干細胞的方法，包括如下步驟：1)在微孔板中將誘導多 能干細胞分化形成類胚體；2)類胚體懸浮培養分化為中胚層細胞；3)分化為中胚層細 胞的類胚體貼壁培養在含誘導因子的含血清或無血清培養基中分化為間充質干細胞。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述誘導因子為bFGF，EGF和PDGF。

9.由權利要求7或8的方法得到的尿液細胞來源的間充質干細胞及其應用。

10.一種在體外將尿液細胞來源的間充質細胞誘導分化為軟骨細胞形成軟骨組織的方法，其 特征在于，使用誘導分化培養基為無血清特定培養液。