[發明專利]一種抗前列腺特異性膜抗原胞外區的納米抗體

有效

• 申請號: 201610074011.3
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105622755B
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發明（設計）人: 范校周;郭燕麗
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;C07K14/47;C07K1/14;C12N15/13;G01N33/68;G01N33/574;B01J20/24
• 代理公司: 南昌大牛專利代理事務所(普通合伙) 36135
• 代理人: 喻莎

本發明屬于基因工程領域，具體為針對前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體，其具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列，可用于免疫檢測、抗原富集純化等領域。本發明所提供的氨基酸序列可以作為前體，通過隨機或定點突變技術進行改造，能夠獲得性質（親和性、特異性、穩定性等）更好的突變體，用來發展進一步用于醫藥、工業、農業的蛋白質或多肽。

技術領域

本發明涉及單域重鏈抗體技術(又稱納米抗體技術)，以及基因工程抗體技術，特別是針對前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體或多肽。

技術背景

單域抗體是指由普通抗體可變區(VH或VL)組成的基因工程抗體。單域重鏈抗體(又稱為納米抗體，VHH抗體，variable domain of heavy chain of heavy-chainantibody)是指僅由重鏈抗體(heavy-chain antibody)可變區(Variable region)組成的基因工程抗體，其中，重鏈抗體(heavy-chain antibody)是一種存在于駱駝、鯊魚等動物體內天然缺失輕鏈的抗體。單域重鏈抗體是目前已知的最小的完整抗原結合片段，具有分子量小、滲透性好等特點，目前已廣泛用于基礎研究、醫學診斷和檢測、抗體藥物開發等領域。

前列腺癌是一種嚴重威脅老年男性健康的惡性腫瘤，其早期診斷和治療對于其預后具有重要的意義。前列腺特異性膜抗原(prostate specific membrane antigen，PSMA)是一種位于前列腺細胞膜上的II型跨膜糖蛋白，由750個氨基酸組成，分為胞內區(氨基酸序列為1-18)、跨膜區(19-43)和胞外區(44-750)，相對于傳統用于臨床檢測的前列腺特異抗原(prostate specific antigen，PSA)，是一種更加敏感和特異的前列腺癌腫瘤標記物，尤其是在激素難治性前列腺癌及前列腺癌轉移灶中均為高表達，在區分前列腺癌和其他類型惡性腫瘤的敏感度和特異性分別為65.9％和94.5％。另外，在多種非前列腺來源的實體瘤，如肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、腎癌和結直腸癌等，PSMA也高度特異地表達于腫瘤血管內皮細胞上。而且本身具有神經羧基肽酶和葉酸水解酶的活性，加之707個氨基酸組成的胞外區能夠提供多個抗原表位等特點，使其成為了腫瘤免疫靶向治療和分子影像學中重要的研究靶點。

目前，人們發現了多種針對PSMA亦制備了多種能與其發生特異性結合的物質，包括單克隆抗體7E11、J591，適體A9和A10，重組技術得到的ScFv抗體D7、Fab抗體及人源化抗體的報道，特別是已經通過美國FDA批準用于前列腺癌的診斷和晚期核素治療的111In-噴地肽，就是基于針對PSMA的單克隆抗體與放射性核素相連而成。但與單域重鏈抗體相比，這些配體存在生產成本相對較高，制備過程復雜等缺點。

發明內容

本發明的目的是提供針對前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體，可以被用于制備檢測前列腺特異性膜抗原的試劑和工具。

本發明提供一個針對前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體(即本發明一種抗前列腺特異性膜抗原胞外區的納米抗體)，具有SEQ ID NO.：1所示的氨基酸序列，其氨基酸序列可通過標準化的抗體氨基酸序列編號方法(ImMunoGeneTics，IMGT)進行編號和結構域的劃分。

本發明提供一種蛋白質或多肽，其特征是包含框架區中的一個或者兩個以上的氨基酸序列，且至少與一個氨基酸序列具有90％同源性。

本發明提供一種蛋白質或多肽，其特征是包含互補決定區中的一個或者兩個以上的氨基酸序列，且至少與一個氨基酸序列具有80％同源性。

本發明提供一個核酸分子，其特征是編碼SEQ ID NO.：1，通過遺傳密碼子可以隨時獲得該核酸分子的具體序列。該核酸分子的序列如SEQ ID NO.：2。

本發明還提供一個核酸分子，其特征是編碼SEQ ID NO.：1部分結構域，通過遺傳密碼子可以隨時獲得該核酸分子的具體序列。