[發(fā)明專利]能特異結(jié)合前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610073980.7
• 申請(qǐng)日: 2016-02-03
• 公開（公告）號(hào): CN105542008A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 涂追;許楊;付金衡;陶勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/30
• 分類號(hào): C07K16/30;C07K14/47;C07K1/14;C12N15/13;G01N33/68;G01N33/574;B01J20/24
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及單域重鏈抗體技術(shù)(又稱納米抗體技術(shù))，以及基因工程 抗體技術(shù)，特別是針對(duì)前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體或多肽。

技術(shù)背景

單域抗體是指由普通抗體可變區(qū)(VH或VL)組成的基因工程抗體。 單域重鏈抗體(又稱為納米抗體，VHH抗體，variabledomainofheavychain ofheavy-chainantibody)是指僅由重鏈抗體(heavy-chainantibody)可變區(qū) (Variableregion)組成的基因工程抗體，其中，重鏈抗體(heavy-chain antibody)是一種存在于駱駝、鯊魚等動(dòng)物體內(nèi)天然缺失輕鏈的抗體。單 域重鏈抗體是目前已知的最小的完整抗原結(jié)合片段，具有分子量小、滲透 性好等特點(diǎn)，目前已廣泛用于基礎(chǔ)研究、醫(yī)學(xué)診斷和檢測(cè)、抗體藥物開發(fā) 等領(lǐng)域。

前列腺癌是一種嚴(yán)重威脅老年男性健康的惡性腫瘤，其早期診斷和治 療對(duì)于其預(yù)后具有重要的意義。前列腺特異性膜抗原(prostatespecific membraneantigen，PSMA)是一種位于前列腺細(xì)胞膜上的II型跨膜糖蛋 白，由750個(gè)氨基酸組成，分為胞內(nèi)區(qū)(氨基酸序列為1-18)、跨膜區(qū)(19-43) 和胞外區(qū)(44-750)，相對(duì)于傳統(tǒng)用于臨床檢測(cè)的前列腺特異抗原(prostate specificantigen，PSA)，是一種更加敏感和特異的前列腺癌腫瘤標(biāo)記物，尤 其是在激素難治性前列腺癌及前列腺癌轉(zhuǎn)移灶中均為高表達(dá)，在區(qū)分前列 腺癌和其他類型惡性腫瘤的敏感度和特異性分別為65.9％和94.5％。另外， 在多種非前列腺來源的實(shí)體瘤，如肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、腎癌和 結(jié)直腸癌等，PSMA也高度特異地表達(dá)于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞上。而且本身 具有神經(jīng)羧基肽酶和葉酸水解酶的活性，加之707個(gè)氨基酸組成的胞外區(qū) 能夠提供多個(gè)抗原表位等特點(diǎn)，使其成為了腫瘤免疫靶向治療和分子影像 學(xué)中重要的研究靶點(diǎn)。

目前，人們發(fā)現(xiàn)了多種針對(duì)PSMA亦制備了多種能與其發(fā)生特異性結(jié) 合的物質(zhì)，包括單克隆抗體7E11、J591，適體A9和A10，重組技術(shù)得到 的ScFv抗體D7、Fab抗體及人源化抗體的報(bào)道，特別是已經(jīng)通過美國FDA 批準(zhǔn)用于前列腺癌的診斷和晚期核素治療的111In-噴地肽，就是基于針對(duì) PSMA的單克隆抗體與放射性核素相連而成。但與單域重鏈抗體相比，這 些配體存在生產(chǎn)成本相對(duì)較高，制備過程復(fù)雜等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供針對(duì)前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體，可以 被用于制備檢測(cè)前列腺特異性膜抗原的試劑和工具。

本發(fā)明提供一個(gè)針對(duì)前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體(即本發(fā)明 能特異結(jié)合前列腺特異性膜抗原的單域重鏈抗體)，具有SEQIDNO.：1所 示的氨基酸序列，其氨基酸序列可通過標(biāo)準(zhǔn)化的抗體氨基酸序列編號(hào)方法 (ImMunoGeneTics，IMGT)進(jìn)行編號(hào)和結(jié)構(gòu)域的劃分。

本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)或多肽，其特征是包含框架區(qū)中的一個(gè)或者 兩個(gè)以上的氨基酸序列，且至少與一個(gè)氨基酸序列具有90％同源性。

本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)或多肽，其特征是包含互補(bǔ)決定區(qū)中的一個(gè)或 者兩個(gè)以上的氨基酸序列，且至少與一個(gè)氨基酸序列具有80％同源性。

本發(fā)明提供一個(gè)核酸分子，其特征是編碼SEQIDNO.：1，通過遺傳密 碼子可以隨時(shí)獲得該核酸分子的具體序列。該核酸分子的序列如SEQID NO.：2。

本發(fā)明還提供一個(gè)核酸分子，其特征是編碼SEQIDNO.：1部分結(jié)構(gòu) 域，通過遺傳密碼子可以隨時(shí)獲得該核酸分子的具體序列。

本發(fā)明所提供的核苷酸序列或者至少部分序列可以通過合適的表達(dá) 系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)以得到相應(yīng)的蛋白質(zhì)或多肽。這些表達(dá)系統(tǒng)包括細(xì)菌，酵母 菌，絲狀真菌，動(dòng)物細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，植物細(xì)胞，或無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。

本發(fā)明還提供一種載體，包含所述核酸序列。由于遺傳密碼子具有簡 并性，該核酸序列可以根據(jù)不同的應(yīng)用目的而不同。

本發(fā)明還提供一種宿主細(xì)胞，包括所述蛋白質(zhì)或表達(dá)載體。