[發明專利]鲬和李氏*的快速鑒別試劑盒及鑒別方法在審
| 申請號： | 201610072848.4 | 申請日： | 2016-02-01 |
| 公開（公告）號： | CN105525020A | 公開（公告）日： | 2016-04-27 |
| 發明（設計）人： | 鮑相渤;劉衛東;王彬;赫崇波;劉修澤;蘇浩;李玉龍 | 申請（專利權）人： | 遼寧省海洋水產科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 大連格智知識產權代理有限公司 21238 | 代理人： | 劉曉琴 |
| 地址： | 116023 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 快速 鑒別 試劑盒 鑒別方法 | ||
1.鲬和李氏的快速鑒別試劑盒，其特征在于包括堿基序列為SEQID No.1/2的引物對，以及限制性內切酶HinfI或其同切酶。
2.鲬和李氏的快速鑒別方法，包括對樣品總DNA進行PCR擴增的步驟， 其特征在于，PCR擴增引物對的堿基序列為SEQIDNo.1/2。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，還包括PCR產物酶切的步驟， 所述的酶切步驟使用限制性內切酶HinfI或其同切酶。
4.根據權利要求3所述的方法，包括如下步驟：
a.提取樣品總DNA；
b.PCR擴增：以步驟a所提取的樣品總DNA為模板，使用引物SEQID No.1/2進行PCR擴增；
c.使用限制性內切酶HinfI或其同切酶對步驟b所得PCR擴增產物進行酶 切；
d.對步驟c所得酶切產物進行電泳檢測；
e.結果判定。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步驟a使用海洋動物 組織基因組DNA提取試劑盒提取待測樣品總DNA。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟b所述的PCR擴增包括 如下參數：
94℃預變性2min；
94℃30s,58℃30s,72℃1min，30個循環；
72℃延伸10min。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步驟c中酶切反應體 系內的PCR產物終濃度不超過50ng/μL，內切酶終濃度0.5U/μL，反應液于37℃ 保溫40min。
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步驟d中，電泳檢測 條件參數包括：0.5×TBE緩沖液，1.5％的瓊脂糖凝膠電泳，恒壓120V、電流 50mA，電泳30～35min。
9.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步驟e結果判定是根 據下述標準判定樣品來源：
a.凝膠電泳結果包含399bp和279bp條帶，則供試樣品來自鲬；
b.凝膠電泳結果包含399bp和200bp條帶，則供試樣品來自李氏
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