[發明專利]一種石油降解固定化細菌混懸劑的制備方法

在審

• 申請號: 201610072360.1
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105505912A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 陳蓉蓉;高力群
• 申請（專利權）人: 常州市慶發工業氣體有限公司
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種石油降解固定化細菌混懸劑的制備方法，屬于石油處理技術領域。

背景技術

隨著海底及海岸帶石油的不斷開采，由鉆井漏油、輸油線漏油等問題造成的環境污染尤其是海水石油污染越來越突出，給海洋環境及人類的生存發展帶來了極大的困擾，同時也造成了資源的極大浪費。石油污染的治理歷經演變，目前主要是三種方法，物理法、化學法及生物法。傳統的物理法，例如圍油欄、吸油材料和撇油器等器材的使用，需要耗費大量的人力、物力和財力，雖然可以清除表面大部分的石油并且能夠在較短時間內避免對海水、生物等造成進一步的傷害，但治理成本較高，難以徹底清除海水表面的浮油及溶于海水的一小部分石油；化學法主要是化學分散劑的使用，能夠增加石油與海水的接觸面積，加速石油的乳化，促進微生物的降解，但是化學分散劑本身就具有一定的毒性，除了對海洋中生物以及人類的健康造成影響外，還會對海洋環境造成二次污染，增加石油污染治理的難度。

現有治理海洋原油污染的方法主要是生物法，生物法是近年來重點研究及推廣的治理措施，主要是利用微生物來降解海水中的石油，這樣既降低了治理成本，又可以安全無二次污染的降解石油。但是現有生物法只能通過將其固定并置于海水中，容易被海水淡化和分散，無法有效地集中在油體附近，導致成本較高且單位時間清除率較低，所以需要一種高效的治理海洋原油污染的方法很有必要。

發明內容

本發明所要解決的技術問題：針對目前的治理海洋原油滲漏污染時，普通方法治理對環境和人體健康造成傷害，現有細菌固定化治理容易被海水淡化和分散，無法有效地集中，導致成本和效率大大降低的缺陷，提供了一種通過將細菌在原油培養基中馴化處理，通過制備可以分解原油的細菌，將其固定化并有效的提高其分散性和溶解度，使其與原油有效的結合并分解，大大加快原油分解的速率，減少治理成本。

為解決上述技術問題，本發明采用如下所述的技術方案是：

（1）稱取10～15g胰蛋白胨，5～8g豬肉湯，5～8g氯化鈉，15～20g瓊脂和600～800mL蒸餾水，依次用冰醋酸溶液和質量濃度為10%氨水溶液調節pH至7.0，隨后升溫加熱至115～120℃，攪拌混合15～20min，冷卻，制備得固體培養基；按枯草芽孢桿菌與多食鞘氨醇桿菌接種比1:1，將其接種至固體培養基上，在120～150rpm的搖床上振蕩培養2～3天，培養得混合菌絲；

（2）稱取0.1g的原油，加入二氯甲烷定容至100mL的容量瓶中，制備得原油混合液，隨后按原油混合液與固體培養基質量比1:5，攪拌混合，得原油培養基，按接種量的10%，將步驟（1）培養的混合菌絲接種至原油培養基中，在30～35℃下，在150～160r/min下搖床振蕩培養5～7天；

（3）待培養完成后，繼續向上述接種完成的原油培養基中加入原油至濃度為2.0g/L，并置于30～32℃，在150～160r/min下搖床振蕩培養5～7天，隨后再控制上述條件不變，依次在原油培養基中增加原油濃度至5g/L、6.5g/L和10g/L，分別馴化培養5～7天；

（4）待馴化培養完成后，對其過濾并收集濾渣，在120～150r/min下離心分離10～15min后，收集下層沉淀并置于步驟（2）制備的原油混合液中，攪拌混合并在100～120W超聲振蕩分散10～15min，得原油降解混合菌液；

（5）量取0.2～0.5mL上述制備的原油降解混合菌液，將其置于25～50mL質量濃度為1%琥珀酸鈉溶液中，在200～250W超聲振蕩處理10～15min，即可得一種石油降解固定化細菌混懸劑。

本發明的應用方法：按投加量為0.5～1.0g/T，將上述制備的石油降解固定化細菌混懸劑投加至還是污染區域，投加2～3周即可有效的分解原有污染區域，原有分解率可達55～58%。

本發明與其他方法相比，有益技術效果是：

（1）本發明制備的石油降解固定化細菌混懸劑投加量小，分解效率高，可在2～3周內，對原有污染區域進行有效治療，分解率可達55～58%；

（2）本發明通過訓化固定細菌混懸劑進行制備，操作簡單，所需成本低。

具體實施方式