[發明專利]一種提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法

有效

• 申請號: 201610072179.0
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105506049B
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發明（設計）人: 胡學博;胡延如
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12R1/645
• 代理公司: 武漢東喻專利代理事務所(普通合伙) 42224
• 代理人: 胡星馳

本發明公開了一種提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：擴大培養階段，按照質量比例0.01?5％向培養液中添加木材降解物，培養時間1?6天。本發明提供的提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，在靈芝菌絲體液體發酵時添加微晶纖維素來誘導靈芝產生更多的胞內靈芝三萜。所使用的誘導劑微晶纖維素安全并且價格低廉，可顯著提高胞內靈芝三萜的含量。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，涉及一種提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法。

背景技術

靈芝(Ganoderma lucidum)是擔子菌綱、多孔菌科、靈芝屬大型藥用真菌，在我國已有數千年的應用歷史。現代科學已經證實靈芝的化學成分有多糖類、三萜類、核苷類、甾醇類、生物堿類、呋喃類、氨基酸類等，其中最重要的藥用成分是靈芝三萜類，具有抗腫瘤、保肝、調節免疫力、降血糖等作用。提高靈芝三萜含量對于靈芝的廣泛應用具有重要作用。

目前研究表明，茉莉酸甲酯、乙酸、苯巴比妥、咪康唑、阿司匹林、銅離子、錳離子等能夠誘導靈芝三萜合成。這些工作為研究靈芝三萜生物合成的調控機制提供了很好的材料和表型。但是考慮到靈芝作為一種藥食同源類中藥，如果想要促進其在醫學界廣泛使用的話，必須考慮到發酵的安全性和經濟性。茉莉酸甲酯作為一種植物激素，因存在健康安全隱患而尚未被實際應用；苯巴比妥和咪康唑是中樞神經抑制藥，阿司匹林是一種解熱鎮痛藥，這些藥物可能的殘留而對健康人產生不良影響；銅離子和錳離子是重金屬，可能引起人體中毒。因此，有必要開發效果更加理想的發酵方法和條件，提高靈芝在菌絲體階段三萜類化合物含量。

發明內容

針對現有技術的以上缺陷或改進需求，本發明提供了一種提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其目的在于通過天然的木材降解物誘導靈芝菌絲體合成靈芝三萜，從而提高其產量，由此解決現有技術提高靈芝三萜含量可能存在不良殘留物的技術問題。

為實現上述目的，按照本發明的一個方面，提供了一種提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

擴大培養階段，按照質量比例0.01-5％向培養液中添加木材降解物，培養時間1-6天。

優選地，所述提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其所述木材降解物，含有微晶纖維素，其含量占培養液的0.01％至5％。

優選地，所述提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其所述木材降解物，含有D-半乳糖，其含量占培養液的0.25％至1％。

優選地，所述提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其所述擴大培養階段為靈芝液體菌種培養開始24至72小時后。

優選地，所述提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其所述靈芝液體菌種培養所用的培養基包括：葡萄糖35克/升，蛋白胨5克/升，酵母粉5克/升，磷酸二氫鉀0.883克/升，七水合硫酸鎂0.5克/升，維生素B1 0.05克/升。

優選地，所述提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其所述靈芝液體菌種培養接種量5％-10％，培養條件：轉速120-150r/min搖瓶培養。

優選地，所述提高靈芝菌絲體液體發酵的胞內靈芝三萜含量的方法，其所述靈芝液體菌種培養接種用種子液按照如下方法獲取：

一級種子培養：按照體積比1:5向靈芝種子培養基中接種靈芝菌絲體，在溫度28-30℃，轉速120-150r/min，培養5天獲得一級種子液；

二級種子培養，按照體積比1:10向靈芝中期培養基中接種一級種子液在溫度28-30℃，轉速120-150r/min，培養2天獲得所述靈芝液體菌種培養接種用種子液。