[發明專利]擬康寧木霉T-51菌株及其在番茄促生和灰霉病生物防治的應用

在審

• 申請號: 201610072158.9
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105586274A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 李國慶;尤佳琪;楊龍;張靜;吳明德
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;馮超

技術領域

本發明涉及植物病害生物防治技術領域，具體地指一種擬康寧木 霉T-51菌株及其在番茄促生和灰霉病生物防治的應用。

背景技術

木霉菌是廣泛存在于自然界的一種真菌。木霉菌(Trichoderma spp.)屬于半知菌亞門，絲孢綱，叢梗孢目，叢梗孢科。木霉菌廣泛 存在于土壤、根圍、葉圍、種子等生態環境中，也是一種優良的生防 菌。由于木霉菌的廣泛適應性、廣譜性和多機制性，因此該菌一直是 植物病害生物防治研究的重點對象。

番茄灰霉病是由灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)引起的重要病 害，在保護地生產中危害尤為嚴重。長期以來，灰霉病防治主要依賴 于化學藥劑。但由于病菌抗藥性迅速產生，并且化學藥劑的過量使用 嚴重污染農產品和生態環境，危及人畜健康。因此，近年來生物防治 正日益成為灰霉病防控中的一條重要的途徑。

發明內容

本發明的目的是提供了一種擬康寧木霉T-51菌株及其在番茄促 生和灰霉病生物防治的應用。

為實現上述目的，本發明提供的一株擬康寧木霉T-51菌株，其 特征在于：菌株為擬康寧木霉(Trichodermakoningiopsis)T-51，其 保藏編號為：CCTCCNO：M2015729。該菌株分離自湖北武漢地區 油菜田土壤中。T-51菌株通過分子水平上ITS序列的測定，在木霉鑒 定網站(http://www.isth.info/)上鑒定為擬康寧木霉(Trichoderma koningiopsis)。因此將菌株T-51定名為擬康寧木霉(Trichoderma koningiopsis)T-51。

該菌種已于2015年12月8日保藏于中國典型培養物保藏中心 (簡稱CCTCC)；保藏登記號為CCTCCM2015729；保藏地點為： 中國、武漢、武漢大學。

進一步地，所述擬康寧木霉T-51菌株置于葡萄糖馬鈴薯瓊脂培 養基PDA上培養一周，菌絲發達、產生大量氣生菌絲，產生蓬松茂 密的產孢簇，呈淺綠色至深綠色，無可溶性色素，無明顯氣味，最適 生長溫度為24～30℃，光照條件有利于其生長和產孢。

本發明提供了一種擬康寧木霉T-51菌株促進番茄種子萌發和幼 苗生長的用途，將番茄種子在擬康寧木霉T-51菌株分生孢子懸浮液 中浸種1～2小時，用于促進番茄種子萌發及幼苗生長。

本發明還提供了一種擬康寧木霉菌株T-51防治番茄灰霉病的應 用，使用擬康寧木霉菌株T-51分生孢子懸浮液抑制灰霉在番茄死體 葉片上產孢，以及接種在番茄根際土壤中防治番茄葉片灰霉病。

本發明提供了一種擬康寧木霉T-51菌株分生孢子懸浮液的制備 方法，包括以下步驟：

1)將擬康寧木霉T-51菌株接種在PDA培養基上培養，得到擬 康寧木霉T-51菌株菌落；

2)將步驟1)得到的擬康寧木霉T-51菌株菌落邊緣菌絲接種到 PDA培養皿上培養；

3)在步驟2)的培養皿中加入無菌水，刮洗菌落表面的分生孢 子，混勻，即得到擬康寧木霉T-51菌株分生孢子懸浮液。

進一步地，所述步驟1)中，培養條件為在溫度為20℃，光照條 件下培養2天；

所述步驟2)中，培養條件為在溫度為20℃，光照條件下培養2 天。

其中，PDA培養基的配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉 11g,補充蒸餾水至1000ml。

PDA制作方法：將洗凈后去皮的馬鈴薯切片，加水800ml煮沸 約半小時，用紗布濾去馬鈴薯，然后加入葡萄糖20g，將11g瓊脂粉 加200ml水攪拌均勻，加入上述溶液中，再加水補足至1000ml，攪 拌溶解后分裝滅菌。

本發明提供了一種利用擬康寧木霉T-51菌株制備抑制番茄灰霉 病菌生長速率的濾液的方法，包括以下步驟：

1)將擬康寧木霉T-51菌株接種在PDA培養基上培養，得到擬 康寧木霉T-51菌株菌落；

2)將步驟1)得到擬康寧木霉T-51菌落邊緣的菌絲塊接種至PDB 培養液中培養，得到培養物；

3)將步驟2)得到的培養物離心，取離心上清液經濾紙過濾， 得到的初級濾液經細菌過濾器再次過濾，得到濾液。

其中，PDB液體培養基的配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，補 充蒸餾水至1000ml。