[發(fā)明專利]一種抗腫瘤相關(guān)抗原WT1特異性CTL及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610070628.8
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105713874A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳尚;劉根桃;李曉祥
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市中美康士生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 竺路玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗腫瘤相關(guān)抗原WT1特異性CTL及其制備方法。

背景技術(shù)

惡性腫瘤是威脅人類生命健康的第二大致死因素。據(jù)統(tǒng)計，2008年全球新發(fā)惡性腫瘤患者1270萬例，死亡760萬例。惡性腫瘤的發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移過程受多層次、多因素調(diào)控，癌基因與抑癌基因作用的失衡是其中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。因此，尋找新的或進一步揭示已有癌基因或抑癌基因的功能，對闡明惡性腫瘤發(fā)生和演進機理、研發(fā)潛在治療靶點具有重要意義。Wilms瘤基因1(Wilms’tumorgene1，WT1)首先在腎母細胞瘤(又稱Wilms瘤)中作為抑癌基因被克隆鑒定，位于人11號染色體短臂1區(qū)3帶，長約50kb，有10個外顯子，富含“GC”同源序列。WT1基因編碼產(chǎn)物為長約52-54kD的蛋白質(zhì)。正常生理情況下，WT1主要在胚胎發(fā)生過程中表達，參與心臟、腎臟和脾臟等器官的形成。WT1在正常成體組織中表達部位局限且表達強度極低。WT1在成體組織中的異常表達與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，但根據(jù)細胞特征不同，其可發(fā)揮癌基因或抑癌基因作用。一方面，在Wilms瘤等兒童惡性腫瘤中，WT1通過干擾細胞增殖信號等途徑抑制細胞生長，發(fā)揮抑癌基因作用；另一方面，WT1可增強腫瘤細胞的抗凋亡能力，并通過調(diào)控原癌基因K-ras增強細胞的增殖能力，提示W(wǎng)T1亦可發(fā)揮癌基因作用。

WT1基因是一種腫瘤相關(guān)性抗原(tumorassociatedantigen,TAA)，在各型白血病有高水平表達，此外在多種實體瘤包括肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、食道癌、肝細胞癌和胃腸間質(zhì)瘤等實體瘤中都有過表達，并且表達水平與預(yù)后呈負相關(guān)。WT1表達水平增高可促進細胞生長、凋亡受抑和誘導(dǎo)WT1轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生白血病；反義寡核苷酸抑制WT1表達或SiRNA沉默WT1后能使白血病細胞及實體瘤細胞生長停止，表明WT1在白血病和實體瘤的發(fā)展中擔當著癌基因角色。根據(jù)以上發(fā)現(xiàn)，表明WT1是免疫治療的理想靶抗原。而且最近美國國家癌癥研究所根據(jù)療效、免疫原性等標準評估了包括WT1在內(nèi)的75個腫瘤抗原，WT1排名第一，被評為免疫治療的首選靶抗原。此外，研究發(fā)現(xiàn)白血病細胞高表達WT1，表明基于WT1的免疫治療，有望靶向殺死腫瘤細胞，進一步證明了WT1作為腫瘤免疫治療優(yōu)越性。為今后腫瘤患者的治療和預(yù)后預(yù)測提供理論依據(jù)。

在人類抗癌歷史上，與癌癥抗爭有過三大利器：外科手術(shù)，化療，與放射治療。至此，免疫科學(xué)家斯坦曼利用先前發(fā)現(xiàn)的樹突狀細胞(Dendriticcell,DC)，激發(fā)自身的免疫力清除腫瘤，利用自己的研究成果，將生命由預(yù)期的數(shù)月延長到四年。由于他對免疫領(lǐng)域的貢獻在2011年獲得諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎，在腫瘤領(lǐng)域并開創(chuàng)了一個新的天地——腫瘤免疫細胞治療。他的研究成果現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床，已經(jīng)成為繼手術(shù)、放、化療后的第四種癌癥治療方式。由于腫瘤免疫細胞治療能夠聯(lián)合手術(shù)、化療、放療精準清除殘余腫瘤細胞，防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，加強免疫監(jiān)視作用，提升患者生存質(zhì)量和時間，并且沒有放化療的毒副作用和手術(shù)的巨大傷害。近年來，在臨床應(yīng)用中受到越來越廣泛的關(guān)注，是國內(nèi)外研究的熱點，已被公認為是最具前景的腫瘤治療方法。

過繼性免疫細胞治療是指通過輸入自身或同種異體的腫瘤殺傷細胞來治療腫瘤的方法。它不僅可以糾正細胞免疫功能的低下，促進宿主抗腫瘤免疫的功能，還可以直接發(fā)揮抗腫瘤的作用。其中細胞毒性T細胞的過繼治療有著特殊的優(yōu)越性。細胞毒性T細胞的過繼治療是實體腫瘤，尤其是腫瘤相關(guān)抗原比較明確的惡性黑色素瘤、結(jié)直腸癌、肝癌、前列腺癌、肺癌等的研究熱點。特異性CTLs(細胞毒性T細胞)的產(chǎn)生是通過將腫瘤抗原負載成熟的DC(樹突狀細胞)刺激T細胞從而獲得抗原的特異性CTLs克隆。這種CTL能識別并殺傷攜帶相應(yīng)腫瘤抗原的惡性細胞，經(jīng)過大量的擴增就能應(yīng)用于臨床治療。這種治療方法相比其他的治療方法具有易獲得、可操作性強，靶向性好，安全性高等特點。