[發(fā)明專利]一種布美諾肽的固相合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610070195.6
• 申請(qǐng)日: 2016-01-30
• 公開（公告）號(hào): CN105601718B
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張穎;陳雷;王仁友;李同金;石鑫磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南康和醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K7/56
• 分類號(hào): C07K7/56;C07K1/10;C07K1/06;C07K1/04
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1.一種布美諾肽的固相合成方法，包括如下步驟：

(a)：Rink Amide Resin與長(zhǎng)鏈脂肪羥基酸HO-(CH₂)_n-COOH偶聯(lián)合成HO-(CH₂)_n-CONH-Rink Amide Resin；

(b)：依照布美諾肽序列，在偶聯(lián)劑存在條件下，依次偶聯(lián)Fmoc-Lys(Mtt)-OH，F(xiàn)moc-Trp(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Arg(pbf)-OH，F(xiàn)moc-D-Phe-OH，F(xiàn)moc-His(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Asp(O-2-Phipr)-OH，F(xiàn)moc-Nle-OH，F(xiàn)moc-Nle-OH偶聯(lián)完成后脫除Fmoc保護(hù)基，以乙酸酐/吡啶進(jìn)行乙酰化，得AC-Nle-Asp(O-2-Phipr)-His(Boc)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mtt)-O-(CH₂)_n-CONH-Rink Amide Resin；

(c)：采用TFA/DCM溶液，選擇性脫除Lys側(cè)鏈保護(hù)基Mtt，Asp側(cè)鏈保護(hù)基O-2-Phipr，得AC-Nle-Asp-His(Boc)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys-O-(CH₂)_n-CONH-Rink AmideResin；

(d)：在偶聯(lián)劑存在條件下進(jìn)行樹脂上環(huán)化，得：AC-Nle-[Asp-His(Boc)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys]_cycle-O-(CH₂)_n-CONH-Rink Amide Resin；

(e)：在裂解劑存在條件下，將肽樹脂裂解及側(cè)鏈脫保護(hù)，得：AC-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]_cycle-O-(CH₂)_n-CONH₂；

(f)：以乙腈/水將AC-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]_cycle-O-(CH₂)_n-CONH₂溶解，在堿性條件下酯鍵水解，溶液調(diào)酸后得布美諾肽粗肽；

(g)：布美諾肽粗肽經(jīng)過純化，凍干，得布美諾肽精肽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布美諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(a)中，所述長(zhǎng)鏈脂肪羥基酸HO-(CH₂)_n-COOH為8-羥基辛酸或16-羥基十六酸，n等于7或15。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布美諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(a)中，所述Rink Amide Resin的替代度為0.4～0.6mmol/g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布美諾肽的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(b)和步驟(d)中偶聯(lián)劑為DMAP/DIC/HOBT，DMAP/DIC/HOAT，DIC/HOBT，DIC/HOAT，HBTU/HOBT/DIPEA，HATU/HOAT/DIPEA中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布美諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(c)中，所述TFA/DCM溶液，TFA所占體積比為3～5％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布美諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(e)中，所述裂解試劑為加入體積比1-5％清除劑的TFA溶液，所述清除劑為苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巰基乙醇、苯酚、水、三異丙基硅烷中的一種或幾種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布美諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(f)中，所述乙腈/水體系中，乙腈所占的比例為5～15％，使用的堿為氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋰中的一種。