[發明專利]一種快速測定細胞內蛋白質相對含量的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201610069820.5
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105738299A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 楊華;郭純
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/33;G01N1/28
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

1.一種快速測定細胞內蛋白質相對含量的方法，其特征在于，該方法步驟如下：

(1)按0.1g樣品加2mL蛋白質和DNA雙抽提液的比例，于樣品中加入蛋白質和DNA雙抽提液，充分研磨樣品至樣品細胞全部破碎，得樣品溶液；其中，蛋白質和DNA雙抽提液是取1mol/L pH為8.0的Tris-HCl 1mL和0.5mol/L pH為8.0的EDTA 0.2mL混勻，用超純水定容到100mL得到；

(2)吸取2份等體積的樣品溶液，其中一份樣品溶液中加入DNA增溶劑，該DNA增溶劑的加入量為樣品溶液體積的1/2，于50-100℃水浴10-30min，冷卻至室溫，然后加入與樣品溶液等體積的氯仿與酚的體積比為24:1的混合液，混合均勻，靜置5-10min，離心，取上清液檢測DNA含量；其中，DNA增溶劑為3-6mol/L NaCl；

(3)另一份樣品溶液中加入蛋白酶抑制劑，該蛋白酶抑制劑的加入量為每1mL樣品溶液加30μl蛋白酶抑制劑，靜置10-30min，離心，取上清液測定蛋白質含量；

(4)計算蛋白質含量與DNA含量的比值，蛋白質含量與DNA含量的比值即為樣品細胞內蛋白質相對含量。

2.如權利要求1所述的一種快速測定細胞內蛋白質相對含量的方法，其特征在于，所述步驟(1)中蛋白質和DNA雙抽提液分兩次加入，第一次于樣品中先加入蛋白質和DNA雙抽提液總體積的一半，充分研磨，再于樣品中加入剩余的蛋白質和DNA雙抽提液，充分研磨至樣品細胞完全破碎。

3.如權利要求1所述的一種快速測定細胞內蛋白質相對含量的方法，其特征在于，所述步驟(3)中的蛋白酶抑制劑是取PMSF 1.742g溶于100mL乙醇中制得X液，再取pepstatin A9.603mg溶于100mL乙醇中制得Y液，取X液和Y液各10mL混勻，即得。

4.一種快速測定細胞內蛋白質相對含量的檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括如下組分：

蛋白質和DNA雙抽提液：取1mol/L pH為8.0的Tris-HCl 1mL和0.5mol/L pH為8.0的EDTA 0.2mL混勻，用超純水定容到100mL；

DNA增溶劑：3-6mol/L的NaCl溶液；

體積比為24：1的氯仿和酚的混合液；

蛋白酶抑制劑：取PMSF 1.742g溶于100mL乙醇中制得A液，再取pepstatin A 9.603mg溶于100mL乙醇中制得B液，取A液和B液各10mL混勻；

蛋白質檢測液：取100mg考馬斯亮藍G-250溶于50mL 95％質量濃度的乙醇中,再加入120mL 85％質量濃度的磷酸,稀釋定容至1000mL。