[發明專利]活性核桃肽的提取方法

在審

• 申請號: 201610068898.5
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105603029A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 孫存寶;李多偉;甘全明;郭秋寶
• 申請（專利權）人: 陜西廣澤農業科技管理有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 陜西增瑞律師事務所 61219
• 代理人: 張瑞琪

1.活性核桃肽的提取方法，其特征在于，按照以下步驟實施：

步驟1、對冷榨油后的干核桃油粕進行篩選后得到渣料a，再對渣料a進行 兩次超聲提取，得到上清液c；

步驟2、對上清液c進行膜濃縮，并得到濃縮液a；

步驟3、對濃縮液a進行兩次酶解，得到酶解液；

步驟4、對酶解液進行膜分離，得到小分子量多肽溶液；

步驟5、對小分子量多肽溶液用納濾膜脫鹽濃縮，得到濃縮液b；

步驟6、再對濃縮液b進行脫色得到脫色處理后的溶液，記為溶液e；

步驟7、再將溶液e用納濾膜脫鹽濃縮得到濃縮液c，將濃縮液c真空濃縮 以及噴霧干燥后得核桃肽產品。

2.如權利要求1所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟1 中，使用篩孔直徑為0.425mm的篩網對冷榨油后的干核桃油粕粉碎料進行篩選， 并得到渣料a。

3.如權利要求1或2所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟 1中，用質量百分濃度為0.1％的Na₂S0₃水溶液浸泡渣料a20～40min，并得到混合 溶液，記為溶液a，其中，Na₂S0₃水溶液與渣料a的重量比為6:1；再向溶液a加 入清水后得到混合溶液，記為溶液b，其中，Na₂S0₃水溶液和清水的總重與渣料 a的重量比為20：1；

再用稀堿溶液將溶液b的PH值調到7.5～8.5，并在50℃～60℃的溫度下進 行超聲攪拌提取1h，通過管式離心機離心得上清液a和渣料b；再向渣料b加入 PH值為8.0-9.0的水得到溶液c，加入的水與渣料b的重量比為20:1，在50℃～60℃ 的溫度下對溶液c進行超聲攪拌提取1h，通過管式離心機離心得上清液b，最后 將上清液a和上清液b混合得到上清液c。

4.如權利要求1所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟2 中膜濃縮的具體方法為：將上清液c用陶瓷膜過濾，得到濾液a，再用納濾膜將 濾液a濃縮至底物濃度為3.5～4.5％，并得到濃縮液a。

5.如權利要求1所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟3 中酶解的具體方法為：向濃縮液a中加入質量百分濃度為3‰的堿性蛋白酶得到 溶液d，并在50-55℃的溫度下對溶液d進行攪拌酶解2小時，使溶液d的PH值 保持為8.5～9.5，待溶液d的PH值降到7-8之間后，再加入質量百分濃度為3‰ 的中性蛋白酶，并在50-55℃的溫度下攪拌酶解2小時，得到酶解液。

6.如權利要求1所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟4 中，將酶解液用稀酸調整至弱酸性，再對酶解液進行沉淀及離心后得到上清液d； 將上清液d用稀堿液調整為中性后，再用超濾膜超濾，得到小分子量多肽溶液。

7.如權利要求6所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟4 中，所述酶解液用稀酸調整至PH值為4-5，再沉淀25～35分鐘后離心得上清液d。

8.如權利要求1所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步驟6 脫色的具體方法為：將非極性大孔樹脂用體積百分濃度為95％的乙醇浸泡24小 時，再用水洗至無醇味，再用摩爾濃度1.0mol/L的NaOH溶液浸泡2小時，再 用水洗至中性，再用摩爾濃度1.0mol/LHCl溶液浸泡2小時，最后水洗非極性 大孔樹脂至中性，再用經上述處理后的大孔樹脂對濃縮液b進行脫色，得到脫色 處理后的溶液。

9.如權利要求1或8所述的活性核桃肽的提取方法，其特征在于，所述步 驟7中，將濃縮液c真空濃縮到密度為1.1～1.3Kg/cm³，并對濃縮液c進行噴霧 干燥后得核桃肽產品。