[發明專利]一種抗骨肉瘤轉移生物制劑及其應用

有效

• 申請號: 201610068863.1
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105505936B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 邊洋;李瑜;楊承剛
• 申請（專利權）人: 固安博健生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;C12Q1/6886
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本發明涉及一種抗骨肉瘤轉移生物制劑及其應用，具體的涉及包含mir?4520?1及其成熟miRNA的生物制劑在制備抗骨肉瘤轉移中的應用。發明對轉移性骨肉瘤患者及健康對照人群進行測序，獲得其miRNA表達數據，篩選出候選的miR?4520?3p。驗證實驗結果表明miR?4520?3p與骨肉瘤密切相關，促進miR?4520?3p的表達能有效抑制骨肉瘤細胞的遷移和侵襲。本發明為臨床提供新的骨肉瘤轉移診療靶點，具有很好的應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體的涉及一種抗骨肉瘤轉移生物制劑及其應用，更具體的涉及包含mir-4520-1及其成熟miRNA的生物制劑在制備抗骨肉瘤轉移中的應用。

背景技術

microRNA(miRNA)是近年來新發現的一類長度為22-23個核苷酸的非編碼小分子RNA，在真核生物中廣泛存在。miRNA通過與靶基因mRNA 3'-UTR完全或不完全的互補配對結合，導致靶miRNA降解或翻譯抑制來調控靶基因的表達，從而影響細胞增殖、侵襲、分化和凋亡等生物學行為。研究表明miRNA在腫瘤的發生發展中發揮著重要作用，這一發現為腫瘤的診斷和治療提供了新的思路。但是，到目前為止，國內外關于miRNA在骨肉瘤中的作用及作用機制的報道尚不多見。

骨肉瘤(osteosarcoma，OSA)是一種原發于骨髓腔的高度惡性實體腫瘤。在原發性骨腫瘤中，骨肉瘤的發病率高居于第2位，僅次于漿細胞骨髓瘤。骨肉瘤是從間質細胞系發展而來，以能產生骨樣組織的梭形基質細胞和腫瘤細胞產生的骨樣組織或不成熟骨為特征。骨肉瘤是臨床上最常見的原發性惡性骨腫瘤，一般好發于兒童和青少年期。骨肉瘤約占惡性骨腫瘤30％和所有兒童腫瘤的3-4％，而且預后較差，5年生存率較低。骨肉瘤臨床治愈難點在于，即使通過截肢治療，許多患者也會在一年內死于肺轉移。骨肉瘤轉移成為骨肉瘤治療中面臨的最重要問題之一。

本發明基于高通量測序方法，對5例轉移性骨肉瘤患者及5名健康對照人群進行測序，獲得其miRNA的表達數據，進而進行生物信息學分析，選取后備miRNA進行分子生物學驗證，結果顯示，本發明提供的miR-4520-3p與骨肉瘤轉移密切相關，可用于骨肉瘤的臨床診斷及預防檢測，具有很好的實際應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抗骨肉瘤轉移生物制劑，包含：

(a)上調mir-4520-1及其成熟miRNA的轉錄和/或促進mir-4520-1及其成熟miRNA的活性的試劑；

(b)藥劑學上能接受的載體。

mir-4520-1序列見序列表SEQ ID NO 1，mir-4520-1的成熟miRNA為miR-4520-3p和miR-4520-5p，miR-4520-3p的序列見序列表SEQ ID NO 2，miR-4520-5p的序列見序列表SEQ ID NO 3。

優選的，采用基于RNA的microRNA功能獲得性技術和/或基因特異性miR Mimics技術上調mir-4520-1及其成熟miRNA的轉錄和/或促進mir-4520-1及其成熟miRNA的活性。優選人工合成miR-4520-3p的Mimics或短發夾RNA(short hairpin RNA，shRNA)或通過調控啟動子上調mir-4520-1及其成熟miRNA的表達。

本發明的目的在于提供上述抗骨肉瘤轉移生物制劑在制備治療骨肉瘤轉移藥物或試劑中的應用。

本發明的目的在于提供一種骨肉瘤轉移診斷試劑，骨肉瘤診斷試劑能夠檢測骨肉瘤樣本中mir-4520-1及其成熟miRNA的轉錄或免疫檢測方法檢測骨肉瘤樣本中mir-4520-1的表達情況。