[發(fā)明專利]堇葉紫金牛快速工廠化生產(chǎn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610068368.0
• 申請(qǐng)日: 2016-02-01
• 公開（公告）號(hào): CN105706924B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫英坤;沈柏春;陳林敬;樊靖;胡玉春;王霽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州市園林綠化股份有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務(wù)所(普通合伙)33230
• 代理人: 尹建民

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及堇葉紫金牛快速工廠化生產(chǎn)方法

二、研究背景

堇葉紫金牛(Ardisia Violacea)，又名裹堇紫金牛，屬紫金牛科紫金牛屬，是一種特產(chǎn)于浙江和臺(tái)灣的珍稀瀕危植物。堇葉紫金牛莖皮灰褐色，被微柔毛，葉片略呈蓮座狀，葉片基部鈍圓或微心形，上面微帶紅色，下面帶淡紫色，邊緣呈不規(guī)則波狀淺圓齒，傘形花序單生于葉腋或莖的上部，花冠白色，花期6-7月，植株姿態(tài)幽雅，紅果艷麗經(jīng)久，圓滑晶瑩，清秀、典雅，紅果配紫葉，令人賞心悅目，并且具有較強(qiáng)的耐蔭性和耐旱性，可作為庭院地被、林下地被和觀葉觀果小盆栽類產(chǎn)品，具有極高的市場(chǎng)開發(fā)價(jià)值。由于堇葉紫金牛為野生資源，且資源量極為有限，常規(guī)的繁育方式，無法在最大化保護(hù)野生資源的基礎(chǔ)上進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，而組培快繁技術(shù)體系的建立則能夠以較少的野生資源為材料，短時(shí)間內(nèi)來進(jìn)行大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)該瀕危植物的資源保護(hù)和種苗繁育，并推動(dòng)該物種市場(chǎng)化的進(jìn)程。

三、發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種堇葉紫金牛的快速工廠化生產(chǎn)方法，提高了生產(chǎn)效率和成活率，降低了生產(chǎn)成本，并且獲得的再生苗能夠穩(wěn)定的延續(xù)野生資源的優(yōu)良性狀。

為此，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案：

1)將無病蟲害的堇葉紫金牛性狀優(yōu)良的單株于3月份開始恢復(fù)生長(zhǎng)時(shí)，將其放到溫室內(nèi)養(yǎng)護(hù)，每隔一周葉面噴灑一次0.3％-0.5％的多菌靈溶液，直至5月份左右。待新芽抽出后，剪取其中半木質(zhì)化的嫩莖，將葉片沿葉柄基部切去，嫩莖切成小段，先用0.5％的新潔爾滅+洗潔精混合溶液攪拌消毒處理1h，倒掉消毒液，在流水下沖洗1h，備用。超凈工作臺(tái)中，處理過備用的小段用無菌水沖洗一下，倒掉無菌水，用70％-75％的酒精溶液消毒60-90s，倒掉酒精后，再用0.1％的升汞溶液消毒5-10min，倒掉消毒液，最后用無菌水反復(fù)沖洗4-5次，備用。無菌水沖洗和消毒處理的過程中，都要不間斷地?fù)u動(dòng)，以保證無菌水和消毒液能夠完全與外植體接觸，提高消毒效率；將以上消毒處理過的莖段切成2cm左右的小段(每段上有1個(gè)休眠的腋芽)，用無菌刀片先把莖段最下端切口褐化的部分切去，迅速將腋芽莖段的芽向上接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為：溫度25±2℃，光照時(shí)間為10h/d，光照強(qiáng)度為1500-2000Lx，濕度為60％-65％。啟動(dòng)培養(yǎng)基為：MS+0.15-0.30mg/L氯吡苯脲(CPPU)+0.10-0.20mg/L萘乙酸(NAA)+3％蔗糖+0.7％瓊脂，pH為5.8-6.0；

2)啟動(dòng)培養(yǎng)20d以后，休眠的腋芽萌發(fā)，將新萌發(fā)的嫩芽切下來，接種到不定芽分化(增殖)培養(yǎng)基上。不定芽分化培養(yǎng)基為：MS+0.50-0.80mg/L氯吡苯脲(CPPU)+0.10-0.20mg/L萘乙酸(NAA)+3％蔗糖+0.7％瓊脂，pH為5.8-6.0；

3)增殖培養(yǎng)40d以后，腋芽分化產(chǎn)生大量不定芽，不定芽以芽叢的形式存在。將得到的不定芽叢，輕輕撥散成單個(gè)不定芽，將單個(gè)不定芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基上。壯苗生根培養(yǎng)條件為：溫度25±2℃，光照時(shí)間為8h/d，光照強(qiáng)度為1000Lx，濕度為60％-65％。所述的壯苗生根培養(yǎng)基為：MS+0.10-0.15mg/L氯吡苯脲(CPPU)+0.5-0.8mg/L吲哚丁酸(IBA)+0.5g/L活性炭+2％蔗糖+0.6％瓊脂，pH為5.8-6.0；

4)壯苗生根培養(yǎng)20d以后，不定芽逐漸分化為健壯的再生小苗，同時(shí)基部產(chǎn)生少量愈傷組織，愈傷組織上部分化出少量不定根。培養(yǎng)40-50d以后，再生小苗的平均株高為4.68cm，平均單株小苗的根系條數(shù)為4.28。將生根的組培瓶苗轉(zhuǎn)移到煉苗坑道中的苗床上，自然環(huán)境下煉苗10d。移栽前3-4d，將組培瓶的瓶蓋松動(dòng)，但不要完全打開，移栽前1-2d，將組培瓶的瓶蓋完全打開，并往組培瓶?jī)?nèi)灌入少量的無菌水，生根組培苗移栽前，先用鑷子將生根苗輕輕地從培養(yǎng)基內(nèi)夾出來，將根部所帶的培養(yǎng)基用清水完全清洗干凈，將清洗好的生根苗以3-4株為一叢種入煉苗基質(zhì)(松鱗，移栽前1周左右，用0.8％高錳酸鉀溶液消毒處理)中。最后，用0.3％多菌靈溶液對(duì)移栽的生根苗和基質(zhì)表面進(jìn)行均勻噴施，以松鱗完全浸濕為宜，然后用塑料薄膜做成封閉的小拱棚，進(jìn)行保溫保濕40d左右。待生根小苗長(zhǎng)出新的須狀根并恢復(fù)健壯生長(zhǎng)后，將小拱棚的兩端打開，緩慢放風(fēng)，約1周后，將小拱棚完全打開，使其在自然條件下生長(zhǎng)。