[發(fā)明專利]新的死亡受體5抗體融合蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610067931.2
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN107022557B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬曉春;李俊鑫;陳倩
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市中科艾深醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;A61K38/17;A61K31/7088;A61P1/16;A61P37/02
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;胡杰

本發(fā)明涉及一種氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的sDR5?Fc重組蛋白(ZJ501?5)及其基因SEQ ID NO：1，并公開了該sDR5?Fc重組蛋白及其基因在制備治療免疫性肝病的藥物中的作用。且本發(fā)明所述的sDR5?Fc蛋白在體外的生物活性比R&D systems公司的sDR5?Fc產(chǎn)品的生物活性高3倍，N端剪切變異體的比例只有1％左右，蛋白藥物穩(wěn)定性高，本發(fā)明所述的sDR5?Fc蛋白能明顯提高Con A誘導(dǎo)急性自身免疫性肝炎小鼠的存活率，對治療人類自身免疫性肝病具有潛在的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及重組蛋白，特別是涉及一種新的死亡受體5抗體融合蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，現(xiàn)階段全球肝炎患者與健康人群的比例約為1/12，即每12個人當(dāng)中就可能存在一位肝炎患者，這一比例是艾滋病感染人群的近十倍。目前，世界各國乙肝、丙肝等肝炎患者接近5億，占全球人口的1/12。中國是肝炎病人最多的國家，每年近30萬人因此死于肝臟相關(guān)疾病，比如肝硬化、肝癌。全球每年有超過50萬人死于原發(fā)性肝癌，而其中多達80％的原發(fā)性肝癌是由慢性肝炎引起的。在4億慢性肝炎患者中，有75％生活在亞洲，而中國是全球肝炎和肝癌負擔(dān)最沉重的國家，我國每年用于乙肝治療的費用高達1000億以上。

肝炎和心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展的病癥表現(xiàn)不盡相同但卻有著共同特點，歸根究底，其關(guān)鍵步驟都涉及肝細胞、心肌細胞或腦細胞的快速凋亡。細胞凋亡是由于細胞接受胞外的死亡信號，激活細胞內(nèi)的凋亡機制引起的細胞主動死亡過程，為維持人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定所必需，具有重要的生物學(xué)作用。但是當(dāng)心腦血管疾病或肝炎發(fā)生時，多重的緊張性刺激如細胞因子、氧化應(yīng)激和DNA損傷等激活細胞凋亡信號，導(dǎo)致大量的心肌細胞、腦細胞或肝細胞死亡。細胞凋亡是心肌梗死、腦梗死及肝炎致細胞死亡的主要方式，并且被認為是這些疾病發(fā)生發(fā)展的基本機制，其相關(guān)分子也成為治療心肌梗死、腦梗死及肝炎的關(guān)鍵靶點。抑制細胞凋亡可以有效的阻止肝炎或心腦血管疾病的發(fā)展。

死亡受體5(Death receptor,DR5)為腫瘤壞死因子(TNF)受體家族的成員，它是腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF－related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的特異性、高親和力受體，在正常細胞表面低表達，在炎癥、缺血或癌變的組織內(nèi)高表達。全長的DR5含有411個氨基酸，屬Ⅰ型跨膜糖蛋白。DR5與TRAIL結(jié)合后可有效激活胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡反應(yīng)。DR5介導(dǎo)的細胞凋亡(圖1)與心肌梗死、腦梗死及肝炎誘導(dǎo)的細胞死亡密切相關(guān)，其可以作為心腦血管疾病及肝炎的共同藥物靶點

sDR5(可溶性死亡受體5，soluble DR5，簡稱sDR5)是一種可溶性蛋白，主要由DR5的膜外區(qū)組成，大小約26kD。人sDR5蛋白通過與細胞膜表面的DR5競爭結(jié)合TRAIL，從而阻斷或封閉TRAIL與DR5結(jié)合的信號通路，減少功能細胞凋亡，減輕功能細胞損傷，以達到防止器官衰竭和病人死亡的作用。另外，sDR5由于是人體自身蛋白，具有毒性小、無免疫原性的優(yōu)點，極具作為心肌梗死、腦梗死及肝炎等疾病的“廣譜”治療藥物的潛質(zhì)。

現(xiàn)有技術(shù)中，R&D systems公司所售的重組人DR5-Fc融合蛋白(科研試劑)在連接之處多了幾個不同于已上市的其它融合蛋白藥物的氨基酸，活性明顯低；穩(wěn)定性也差，發(fā)現(xiàn)有不同比例的N端剪切變異體的存在。這些均給后期的工藝開發(fā)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定帶來麻煩，不適宜作為生物新藥申報。