[發明專利]擬組織金屬蛋白酶抑制因子多肽及其應用

在審

• 申請號: 201610066339.0
• 申請日: 2016-01-30
• 公開（公告）號: CN105601719A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 羅瑞雪
• 申請（專利權）人: 蘇州普羅達生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;A61K38/16;A61P19/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及擬組織金屬蛋白酶抑制因子多肽，具體涉及具有抑制基質金屬蛋 白酶，具有減輕骨質疏松癥的多肽。

背景技術

骨質疏松即骨質疏松癥(osteoporosis)，是多種原因引起的一組骨病，骨組 織有正常的鈣化，鈣鹽與基質呈正常比例，以單位體積內骨組織量減少為特點的 代謝性骨病變。在多數骨質疏松中，骨組織的減少主要由于骨質吸收增多所致。 以骨骼疼痛、易于骨折為特征。

目前，用于治療和阻止骨質疏松癥發展的藥物分為兩大類，第一類為抑制骨 吸收藥，包括鈣劑、維生素D及活性維生素D、降鈣素、二磷酸鹽、雌激素以及 異黃酮；第二類為促進骨性成藥，包括氟化物、合成類固醇、甲狀旁腺激素以及 異黃酮。這些藥物可以阻止骨吸收但對骨形成的作用特別小。

基質金屬蛋白酶家族參與多種正常的生理功能，例如卵細胞著床，骨骼生長 和器官發育等。基質金屬蛋白酶被更多的看作是這些病理過程的調節因子。其家 族成員包括MMP1-26分布于骨基質中。大量研究表明基質金屬蛋白酶參與骨的 重塑和構建且表達骨吸收活性，其中MMP-2、MMP-9等對原發性骨質疏松發病 的影響已被證實。目前研究發現，MMP-2是分布最廣的MMP，其主要作用可能 為降解損傷或變性膠原以保護機體。MMP-9也是明膠酶中的一種。MMP-9包含 一個V型的膠原蛋白結構域，這個結構域有高度的糖基化作用，，它影響底物的 特異性以及有抗衰變的作用。MMP-9有許多作用底物，如Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅺ 型膠原、蛋白聚糖的核心蛋白、明膠、纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈性蛋白等， 細胞因子及其受體也是MMP-9作用的底物。在骨代謝中，首先由MMP-2啟動 骨轉換，隨后激活MMP-9，在MMP-2及MMP-9的作用下水解部分降解的Ⅰ 型膠原及其他多種骨基質蛋白，骨鹽因失去依附而丟失，發生骨質疏松。因此， 測定MMP-2和MMP-9活性是影響骨質疏松的重要指標。抑制基質金屬蛋白酶， 可以有效抑制骨質疏松。組織金屬蛋白酶抑制因子-1(tissueinhibitor ofmetalloproteinase-1，TIMP-1)是由成骨細胞分泌的內源性基質金屬蛋白酶抑制 劑。研究表明，TIMP-1能特異性的抑制基質金屬蛋，在骨重建過程中對啟動骨 吸收與骨形成起著重要作用。因此，制備擬TIMP-1多肽，可以有效抑制MMP， 從而抑制骨質疏松。這一發現為骨質疏松患者的治療找到了新的突破口。盡管如 此，并沒有成熟開發的擬TIMP-1多肽問世，用于治療骨質疏松癥。

發明內容

發明目的

本發明提供全新的序列，該序列為擬組織金屬蛋白酶抑制因子多肽，對骨質 疏松癥具有很好的療效。

技術方案

擬組織金屬蛋白酶抑制因子多肽，其特征在于其序列為 PEPEFHLISAFWPSLPSYLDAA，其多肽在治療骨質疏松癥的應用。

有益效果

擬組織金屬蛋白酶抑制因子多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制基質金 屬蛋白酶2、9的酶活力。在體試驗研究表明，我們設計的多肽可以緩解骨質疏 松模型動物的骨密度下降。

具體實施方式

實施例1

多肽的化學合成方法

多肽用Fmoc化學方法合成。合成反應從C端向N端進行，Rink介質(可在 AdvancedChemTech公司購得)上有自由氨基，按C端向N端的順序將各個氨基 酸連接。每一步連接過程中，氨基酸殘基都要活化，活化混合物中有4倍于介質 上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨基酸。每次氨基酸的連接反應之后， 都用一個吡啶/醋酸/N-甲基咪唑的混合物來封閉未連接的自由氨基。每次氨基酸 的連接反應之后，下一個氨基酸連接之前，都要把介質上的Fmoc-基團去掉，去 Fmoc-基團使用含20％哌啶的二甲基甲酰胺。最后，當所有氨基酸殘基順序連接 之后，多肽用98％三氟乙酸從介質上切割下來。

應用上述化學條件可合成并獲得多肽，序列為PEPEFHLISAFWPSLPSYLDAA， 該序列為全新序列。

也可委托上海吉爾合成。

實施例2

多肽體外對基質金屬蛋白酶2、9的IC50值。