[發明專利]抗體的快速人源化

有效

• 申請號: 201610065918.3
• 申請日: 2011-12-28
• 公開（公告）號: CN105602960B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 杰·M·少特
• 申請（專利權）人: 生物蛋白有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N15/63;C07K16/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;劉成春

1.一種生產人源化抗體或人源化抗體片段的方法，所述方法包括：

(a)合成包含重鏈互補性決定區片段編碼文庫和重鏈框架片段編碼文庫的免疫球蛋白重鏈雙鏈DNA片段文庫，

其中所述重鏈互補性決定區片段編碼文庫包括其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼重鏈互補性決定區并且每個雙鏈DNA片段源自模板抗體的重鏈互補性決定區1的重鏈互補性決定區1編碼文庫；其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼重鏈互補性決定區并且每個雙鏈DNA片段源自模板抗體的重鏈互補性決定區2的重鏈互補性決定區2編碼文庫；以及其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼重鏈互補性決定區并且每個雙鏈DNA片段源自模板抗體的重鏈互補性決定區3的重鏈互補性決定區3編碼文庫，

所述重鏈框架片段編碼文庫包括其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼至少部分重鏈框架并且每個雙鏈DNA片段源自從功能表達的人抗體獲得的人重鏈框架1集合的重鏈框架1編碼文庫；其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼至少部分重鏈框架并且每個雙鏈DNA片段源自從功能表達的人抗體獲得的人重鏈框架2集合的重鏈框架2編碼文庫，以及其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼至少部分重鏈框架并且每個雙鏈DNA片段源自從功能表達的人抗體獲得的人重鏈框架3集合的重鏈框架3編碼文庫；

(b)合成包含輕鏈互補性決定區片段編碼文庫和輕鏈框架片段編碼文庫的免疫球蛋白輕鏈雙鏈DNA片段文庫，

其中所述輕鏈互補性決定區片段編碼文庫包括其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼輕鏈互補性決定區并且每個雙鏈DNA片段源自模板抗體的輕鏈互補性決定區1的輕鏈互補性決定區1編碼文庫；其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼輕鏈互補性決定區并且每個雙鏈DNA片段源自模板抗體的輕鏈互補性決定區2的輕鏈互補性決定區2編碼文庫；以及其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼輕鏈互補性決定區并且每個雙鏈DNA片段源自模板抗體的輕鏈互補性決定區3的輕鏈互補性決定區3編碼文庫，

所述輕鏈框架片段編碼文庫包括其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼至少部分輕鏈框架并且每個雙鏈DNA片段源自從功能表達的人抗體獲得的人輕鏈框架1集合的輕鏈框架1編碼文庫；其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼至少部分輕鏈框架，并且每個雙鏈DNA片段源自從功能表達的人抗體獲得的人輕鏈框架2集合的輕鏈框架2編碼文庫；以及其中文庫的每個雙鏈DNA片段編碼至少部分輕鏈框架并且每個雙鏈DNA片段源自從功能表達的人抗體獲得的人輕鏈框架3集合的輕鏈框架3編碼文庫；

(c)通過以框架1-互補性決定區1-框架2-互補性決定區2-框架3-互補性決定區3的順序逐步液相連接來自所述重鏈框架片段編碼文庫的重鏈框架編碼片段和來自所述重鏈互補性決定區片段編碼文庫的重鏈互補性決定區編碼片段，由所述重鏈片段文庫組裝，以產生人源化重鏈可變結構域編碼文庫；

(d)通過以框架1-互補性決定區1-框架2-互補性決定區2-框架3-互補性決定區3的順序逐步液相連接來自所述輕鏈框架片段編碼文庫的輕鏈框架編碼片段和來自所述輕鏈互補性決定區片段編碼文庫的輕鏈互補性決定區編碼片段，由所述輕鏈片段文庫組裝，以產生人源化輕鏈可變結構域編碼文庫；

(e)將組裝的人源化重鏈可變結構域編碼文庫和組裝的輕鏈可變結構域編碼文庫克隆至表達載體中，以形成人源化文庫，所述表達載體包含編碼重鏈框架區4的核苷酸序列和編碼輕鏈框架區4的核苷酸序列，所述編碼重鏈框架區4的核苷酸序列源自功能表達的人抗體的人重鏈可變結構域，所述編碼輕鏈框架區4的核苷酸序列源自功能表達的人抗體的人輕鏈可變結構域；

(f)將所述人源化文庫轉染至細胞中；

(g)在所述細胞中表達人源化抗體或人源化抗體片段，以形成人源化抗體文庫；

(h)篩選所述人源化抗體文庫，以測定所述人源化抗體或人源化抗體片段的表達水平；和

(i)篩選所述人源化抗體文庫，以選擇與所述模板抗體對抗原的親和性相比對相同抗原的親和性更高的人源化抗體或人源化抗體片段。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述人源化抗體文庫具有10000000個成員或更少。

3.如權利要求2所述的方法，其中所述人源化抗體文庫具有1000000個成員或更少。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述人源化抗體文庫具有100000個成員或更少。